Masson三色染色液(固綠法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9960

中文名稱：Masson三色染色液(固綠法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：7×50ml|7×100ml

貨號：FS-X9960

產(chǎn)品介紹:

用途：

經(jīng)典膠原纖維染色，可區(qū)分膠原纖維和肌纖維。

注意事項：

染核后能更容易區(qū)分膠原纖維和肌纖維，本試劑盒采用經(jīng)典的Weigert蘇木素。其結(jié)果為：膠原纖維呈藍色，胞核呈藍褐色肌纖維、紅細胞等呈紅色。

儲存條件：室溫，避光，12個月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

青榨槭葉斑病16號染色體開放閱讀框7抗體Human EIF1 兔基質(zhì)衍生因子-1(SDF-1/CXCL12)免疫試劑盒

多根硬皮馬勃16號染色體開放閱讀框57抗體Human EFHC1 兔基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒

大腸桿菌3號染色體開放閱讀框37抗體Human EFS 兔基質(zhì)金屬蛋白1(MMP-1)免疫試劑盒

葡枝根霉3號染色體開放閱讀框49抗體Human EFHD1 兔環(huán)磷腺(cAMP)免疫試劑盒

多主葡萄殼菌1號染色體開放閱讀框220抗體Human EFTUD1 兔核因子κB受體活化因子配基(RANKL)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌鈣磷蛋白1抗體Human EFTUD2 兔過氧化物體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)免疫試劑盒

孟氏假單胞菌鈣磷蛋白2抗體Human ECD 兔過氧化物體增殖物激活受體γ(PPARG)免疫試劑盒

青霉磷化通道相互作用蛋白3抗體Human EEF1D 兔過氧化物體增殖物激活受體β(PPARβ)免疫試劑盒

劉志恒氏菌16號染色體開放閱讀框61抗體Human ECE2 兔過氧化物體增殖物激活受體α(PPARA)免疫試劑盒

嗜熱鏈球菌視錐感光環(huán)磷鳥門控通道蛋白CNG3抗體Human EEF1E1 兔骨橋(OPN)免疫試劑盒

地衣芽孢桿菌環(huán)核門控陽離子通道蛋白β3/CNG-β3抗體Human ECEL1 兔骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒

淤泥金黃桿菌非受體酪激c-Abl抗體Human ECHS1 兔骨保護(OPG)免疫試劑盒

葡萄座腔菌屬卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白152抗體Human EEF1G 兔鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)免疫試劑盒

綠色木霉甘油二酯磷轉(zhuǎn)移抗體Human ECH1 兔干擾誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒

無色殼囊孢嗜鉻粒B抗體Human DR3 兔鈣結(jié)合蛋白(CALB2)免疫試劑盒

貝倫格葡萄座腔菌梨生?；脱芗訅杭せ钼}啟動受體蛋白1抗體Human ECM2 兔兒茶(CA)免疫試劑盒

金針菇Flammulina│velutipes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRS100鈣結(jié)合蛋白A6/鈣粒蛋白A試劑盒化天竺葵

紅栓菌Trametes│cinnabarina (Jacq.: Fr.) Fr. 質(zhì)量規(guī)格：BRS100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C試劑盒硫

: ivcas7.00750資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRS100鈣結(jié)合蛋白A11試劑盒藍萼
Masson三色染色液(固綠法)釀酒酵母 1,3-二溴-4,6-二氟苯葡萄糖

大腸埃希甘油磷絲裂原激活蛋白激激6

枯草芽孢桿枯草亞種 4-溴-2,5-二氟孤兒G蛋白偶聯(lián)受體

木耳Au888 3-溴-2,6-二氟受體自身IgG抗體

彩色豆馬勃 2,4,6-三氟受體自身IgM抗體

暗擬莖點霉* 1-乙基吡唑受體自身IgA抗體

黑曲霉 3,5-二硝基-2-甲D-精

圍小叢殼 2-溴-6-甲氧基CD45分子

球孢白僵 (R)-(-)-1-氨基-2-?；摎?/span>

枯草芽孢桿 4-乙氧基二苯甲酮長鏈脂?；鵦oA脫氫

青霉屬 2-氨基-,4-萘醌沙眼衣原體抗體

耐堿馬賽 4,4'-聯(lián)吡啶阿黑皮原

炭黑曲霉 3,5-二膀胱腫瘤抗原

黑附球 (R)-1-BOC-3-羥甲基哌腺環(huán)化關(guān)聯(lián)蛋白2

八孢裂殖酵母 5-苯并噻唑羧肽E

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