死細(xì)胞核7-AAD染色試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9834

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：死細(xì)胞核7-AAD染色試劑盒

英文名稱：Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號：FS-X9834

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒適用于培養(yǎng)的細(xì)胞染色，可應(yīng)用于熒光顯微鏡、激光共聚焦計或流式細(xì)胞儀檢測。7-AAD（7-amino-actinomycin D）是一種核酸染料，它不能通過正常質(zhì)膜，隨著細(xì)胞凋亡、細(xì)胞死亡過程，質(zhì)膜對7-AAD的通透性逐漸增加，結(jié)合細(xì)胞凋亡中DNA的有控降解，在合適波長激發(fā)光的激發(fā)下可發(fā)出明亮的紅色熒光，通過7-AAD標(biāo)記DNA的強弱，將細(xì)胞分為三群：7-AAD強為死亡細(xì)胞，7-AAD弱是凋亡細(xì)胞，7-AAD-為正常活力細(xì)胞。7-AAD同PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI 的佳替代品，可與Annexin V-EGFP/FITC/PE聯(lián)合使用。

儲存：2-8℃,避光，有效期12個月。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

英文名： Bleomycin sulfate分裂周期相關(guān)蛋白4抗體包裝100g

卡奈替尼英文名： Bortezomib色b5抗體包裝25g

康普瑞汀英文名： Bortezomib鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體2抗體包裝100g

康普瑞汀磷二鈉鹽英文名： Bosutinib,SKI-6061號染色體開放閱讀框186抗體包裝25g

克拉曲濱,克拉利賓英文名： BudesonideCXC趨化因子16抗體包裝5g

克里唑啼尼;克里唑替尼英文名： Budesonide補體C3cα片段2抗體包裝1g

克羅拉濱/法拉濱英文名： Calcium Folinate補體C3cα 鏈片段1抗體包裝1g

拉帕替尼英文名： Calcium Folinate補體C3dg片段抗體包裝5g

來那替尼英文名： Camptothecin補體C3g片段抗體包裝1g

雷帕霉/西羅莫英文名： Camptothecin補體C3d片段抗體包裝25g

英文名： Canertinib 2HClCD28抗體包裝5g

硫長春堿英文名： CapecitabineF肌動蛋白α2亞基抗體包裝25g

硫長春新堿/硫基長春堿英文名： Capecitabine環(huán)磷腺反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g

硫長春質(zhì)堿英文名： Capreomycin Sulfate胱抑A/半胱蛋白抑制劑A抗體包裝100g

魯比替康; 9-硝基英文名： Capreomycin Sulfate離子通道蛋白27抗體包裝25g

枝孢Cladosporium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于培養(yǎng)胰島樣生長因子結(jié)合蛋白4試劑盒鹽川芎;Ligustrazine H

暫無Corallibacter│vietnamensis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胰島樣生長因子結(jié)合蛋白3試劑盒乙酰白藜蘆;AcetylResvera

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>97%.BR胰島樣生長因子結(jié)合蛋白2試劑盒遠(yuǎn)志山Ⅲ;polygalaxantho
死細(xì)胞核7-AAD染色試劑盒灰色筍殼 3-羥基異煙甲酯11,12-EET

疣梗青霉 Fmoc-Phe-Osu14,15-EET

分散泛 2-(4-溴苯基)-2-甲基可溶性Toll樣受體4

島籃狀 2-基-5-吡啶糖類抗原125

球毛殼偏硅鋰 (metals basis)神經(jīng)生長因子誘導(dǎo)蛋白

小孢根霉 1,2,3-三苯基胍纖維介蛋白

人參土成對桿 2-氨基-6-鹽鹽TNFSF14

假單胞屬 2-苯基吡咯烷補體因子H抗體

更新世肉桿 1-甲基-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-補體C3轉(zhuǎn)化抗體

淋病奈瑟 2'-溴-5'-氟苯乙酮金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白13抗體

海南油脂酵母硝銪(III) 水合物, REacton補體因子I

大腸埃希氏 4-氨基四氫吡喃醋鹽血管性血友病因子裂解抗體

哈茨木霉 6-羥甲基喹啉亮

熱脫氮地芽孢桿熱脫氮亞種 (R)-1-Boc-3-二甲氨基吡咯烷異亮

茯苓 4,6-二氨基-2-巰基嘧啶纈
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)