改良Gomori三色染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9962

產(chǎn)品介紹:

用途：

又稱MGT染色液。肌肉活檢，肌纖維呈青綠色，膠原纖維呈亮綠色，細(xì)胞核呈紫色，線粒體呈紅色。

注意事項(xiàng)：

新鮮材料盡快進(jìn)行冰凍切片。Gomori染色液應(yīng)冰箱內(nèi)存放，超過有效期建議丟棄以保證染色鮮亮。分化時(shí)間應(yīng)根據(jù)染液配制時(shí)間適當(dāng)調(diào)整，時(shí)間越長(zhǎng)，分化時(shí)間約短。

儲(chǔ)存條件：4℃，避光，6個(gè)月

中文名稱：改良Gomori三色染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：4×50ml|4×100ml

貨號(hào)：FS-X9962

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

嗜芽孢桿菌趨化樣因子超家族成員2抗體Human DDX3(DEAD box protein 3, X-chromosomal) 兔阿霉(ADR)免疫試劑盒

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西西布哈加瓦氏菌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體Human CXCL17 兔N端前腦鈉(NT-proBNP)免疫試劑盒

谷棒狀桿菌ATCC13032凋亡抑制因子抗體Human DEFB121 兔NADPH氧化1(NOX1)免疫試劑盒

根霉D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體Human DNAJB11 兔C肽(C-Peptide)免疫試劑盒

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變異短波單胞菌20號(hào)染色體開放閱讀框14抗體Human DNAJB4 兔CD4分子(CD4)免疫試劑盒

多粘芽孢桿菌結(jié)締組織生長(zhǎng)因子抗體Human Cyclin T1 兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌性T抗原-4抗體Human DNAJB(DnaJ homolog subfamily B member 8) 兔ADAM金屬肽含血小板反應(yīng)蛋白1型13(ADAMTS13)免疫試劑盒

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釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>96.5%,BRRho GDP解離抑制因子1試劑盒輪環(huán)藤寧

Clostridium cellulosiClostridium cellulosi 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRREST協(xié)阻抑因子3試劑盒龍膽山

堅(jiān)強(qiáng)芽胞桿菌Bacillus│firmus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRras同源物基因家族成員b試劑盒內(nèi)酯
改良Gomori三色染色液麥芽糖假絲酵母 4-氮雜可溶性CD40分子

新月彎孢 Boc-5-氨基戊γ氨基丁受體

黃孢平革 2-乙?；邕蛘车鞍?B抗體

腐皮殼磷一水合物磷二酯3A

弗雷德里克斯堡假單胞耐曬猩紅RC鉤端螺旋體

不吸水鏈霉九氟戊蘭尼堿受體3

寄生孢 D-谷二甲酯鹽鹽6磷葡萄糖

巨大曲霉 2-溴-5-甲酯5磷核酮糖

禾粘座孢霉（或禾漆斑） N,N-二異酰甲殼質(zhì)蛋白40

鹽水鹽土生古 (R)-2-羥基-3-苯基甲酯氨基

豬丹絲 8-溴-1-辛烯嗜TI型病

栗疫 4-羥基苯頻哪酯阿拉伯糖

波恩佩島蒼黃色桿 D-2,4-二氨基丁ZDNA結(jié)合蛋白1

木霉 5--2-呋喃甲R(shí)AS癌基因家族

膠孢異壬天門冬氨基轉(zhuǎn)移

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