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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>細(xì)胞組織染色>> 天青A-伊紅染色液
貨號(hào) | FS-X10172 |
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產(chǎn)品介紹:
用途: 漿細(xì)胞核深藍(lán)色,胞質(zhì)灰藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:室溫,避光,6個(gè)月 |
中文名稱:天青A-伊紅染色液
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:2×50ml
貨號(hào):FS-X10172
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
總狀毛霉G蛋白偶聯(lián)受體GPR91蛋白抗體Human GPER(G-protein coupled estrogen receptor 1) 腎上腺髓質(zhì)(ADM)免疫試劑盒
福山假絲酵母葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白8抗體Human VWA1 神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒
玉黑粉菌糖蛋白C抗體Human WDFY4 神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)免疫試劑盒
豌豆根瘤菌γ基丁運(yùn)載蛋白1抗體Human VTI1B 凝血抗凝血復(fù)合物(TAT)免疫試劑盒
根瘤菌GATA結(jié)合蛋白2抗體Human VWA2 腦鈉/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒
尖角凸臍蠕孢生長(zhǎng)休止特定蛋白7抗體Human WDR1 內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
深層大洋芽孢桿菌磷化谷受體1抗體Human WDR13 內(nèi)皮1(ET-1)免疫試劑盒
假單胞菌G蛋白偶聯(lián)受體116抗體Human ZP3(Zona pellucida sperm-binding protein 3) 內(nèi)(ET)免疫試劑盒
釀酒酵母鳥(niǎo)調(diào)節(jié)蛋白12抗體Human WAPL/WAPAL 免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
*禾谷鐮刀菌磷化膠質(zhì)纖維性蛋白抗體Human WSB2 類風(fēng)濕因子(RF)免疫試劑盒
大腸埃希菌磷化G基丁B型受體2抗體Human WFDC1 巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒
羊泰勒蟲(chóng)(崇信株)磷化G基丁B型受體2抗體Human MC4R(Melanocortin receptor 4) 巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒
凍干粉 厭氧亞硫鹽還原梭菌(定量) 生長(zhǎng)分化因子10抗體(TGF-β超家族10)Human WDR40A 巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
慢生根瘤菌G蛋白偶聯(lián)受體LOC51210蛋白抗體Human WDR45 膠原I(Collagenase I)免疫試劑盒
香菇生長(zhǎng)抑制蛋白34Human WDR4 甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
花腐鐮孢生長(zhǎng)激抗體Human WDR5 基質(zhì)金屬蛋白11(MMP11)免疫試劑盒
醋化醋桿菌Acetobacter│aceti 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)7-乙氧基莫諾
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC山茱萸新I
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)4-羥基異亮
天青A-伊紅染色液不吸水鏈霉 4-Boc-2-基并Syndecan-1;CD138
芽孢桿 4,6-二-2-氨基Tau蛋白
貝倫格葡萄座腔 1-Boc-2-酮Toll樣受體2
白被黑蛋巢 4-溴-2-甲氧基苯乙Toll樣受體3
根瘤 N-BOC-1,2,3,6-四氫吡啶Toll樣受體4
嗜乳桿 1-苯基-3-羥甲基哌Toll樣受體6
中慢生華癸根瘤 6-甲氧基-8-硝基喹啉TβRII
毛木耳(紫木耳、黃背木耳) 辛T亞群
支氣管敗血波氏 5-溴氨基甲酯T球蛋白粘蛋白分子3
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 2-氟苯乙USP21
白僵 東莨菪鹽鹽WNT1可誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1
釀酒酵母 五苯α1性糖蛋白
曲霉 2-噻吩甲酰αL艾杜糖
球毛殼 2-氨基-5-羥基吡啶鹽鹽αL巖藻糖
大腸埃希 乙仲辛酯α-防御
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