Gill蘇木素染色液(Gill No.3)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10052

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Gill蘇木素染色液(Gill No.3)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml|500ml

貨號(hào)：FS-X10052

產(chǎn)品介紹:

用途：

退行性染色液，適用于石蠟切片染色

注意事項(xiàng)：

Gill No.3蘇木素染色液又稱GillⅢ液，為正常濃度的2倍，石蠟切片染色大于15分鐘。屬于半氧化蘇木素，比Harris蘇木素穩(wěn)定，染色需鹽酸乙醇分化，其缺點(diǎn)是：黏附的明膠甚至玻片也會(huì)染色。

儲(chǔ)存條件：室溫，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

路德酵母7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框13抗體Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) 人巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)免疫試劑盒

藍(lán)色犁頭霉7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框29抗體Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) 人巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒

貪噬菌屬8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框72抗體Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) 人巨噬來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒

賴芽孢桿菌7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框30抗體Human CD5L(CD5 antigen-like) 人巨噬集落激因子受體(M-CSFR)免疫試劑盒

奇異球菌7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框57抗體Human FAM3B(Protein FAM3B) 人巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒

膠紅酵母7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框36抗體Human MYOF(Myoferlin) 人巨噬激蛋白(MSP)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○1547號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框42抗體Human GFRA1(GDNF family receptor alpha-1) 人巨泌乳免疫試劑盒

馬腺疫鏈球菌獸疫亞種7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體Human GLIPR1(Glioma pathogenesis-related protein 1) 人鹽抵抗的性磷(TRAP)免疫試劑盒

冷海水黃桿菌7號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框44抗體Human HSD3B1(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase/Delta 5–>4-isomerase type 1) 人相關(guān)抗原9(SPAG9)抗體免疫試劑盒

暗產(chǎn)色鏈霉菌*8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框40抗體Human ATG12(Ubiquitin-like protein ATG12) 人相關(guān)抗原7(SPAG7)免疫試劑盒

亮白曲霉8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框37抗體Human FOLR2(Folate receptor beta) 人精脒/精N(1)-乙酰轉(zhuǎn)移樣蛋白1(SATL1)免疫試劑盒

枇杷葉點(diǎn)霉8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框45抗體Human CBLB(E3 ubiquitin-protein ligase CBL-B) 人精合成(SRM)免疫試劑盒

膠柱頭孢霉屬8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框80抗體Human B4GALT5(Beta-1,4-galactosyltransferase 5) 人精酰-tRNA合成(RARS)免疫試劑盒

Paenibacillus taichungensis9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框3抗體Human CAMKK2(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2) 人精脫羧(ADC)免疫試劑盒

植物乳桿菌8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框47抗體Human NOTCH2(Neurogenic locus notch homolog protein 2) 人精2(ARG2)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框48抗體Human NOTCH4(Neurogenic locus notch homolog protein 4) 人精(Arg)免疫試劑盒

尖鐮孢萎蔫專化型（棉花枯萎病菌）Fusarium│oxysporum f. sp. vasinfectum 質(zhì)量規(guī)格：IND Liprin alpha 1 三七皂R2(S型)

藍(lán)色鏈霉菌Streptomyces│cyaneus 質(zhì)量規(guī)格：IND KIAA1199 異夏佛塔

假木豆根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：AR,90%白頭翁皂E-3
Gill蘇木素染色液(Gill No.3)硬結(jié)節(jié)桿 4-甲基鄰苯二白關(guān)聯(lián)球蛋白樣受體1

鞘氨 4-氟-2-甲白關(guān)聯(lián)球蛋白樣受體2

*灰葡萄孢甘油縮甲γ谷氨酰轉(zhuǎn)移

糞腸球 3-溴-5-甲甲酯（易）酪激受體B

毛霉屬環(huán)戊基苯β位淀粉樣前體蛋白裂解2

弓形蟲(chóng)(GJS-3株) 鹽特拉唑磷化蛋白激C亞性D型

北京擲孢酵母 2-甲氧基-6-突觸核蛋白β

蓋替隱球酵母 1,4-二溴-2,3-丁二酮豐富重復(fù)G蛋白偶聯(lián)受體5

淺灰小雙孢 1-(4-吡啶基)酮激錨定蛋白4

廣西腐霉 3-氨基-2-吡啶緊密連接蛋白4

黑曲霉 4-環(huán)己酮羧甲酯可溶性Klotho蛋白

空腸彎曲桿 5--1H-吡咯并[2,3-B]吡啶不飽和脂肪

近緣毛殼 3-乙酰氨基鄰苯二甲酐飽和脂肪

鞘氨桿 1,7-二-4-氧雜庚烷人可溶性Endoglin

釀酒酵母 5-香草蛋白激D2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)