抗酸染色液(Kinyoun冷染法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10118

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：抗酸染色液(Kinyoun冷染法)

英文名稱：

產品規(guī)格：3×50ml|3×100ml

貨號：FS-X10118

產品介紹:

用途：

抗酸菌(結核桿菌等)染色，可鑒別抗酸菌與非抗酸菌

注意事項：

抗酸菌染色中l(wèi)eagene公司推薦采用該染色液。經典抗酸菌染色法，結果為：抗酸桿菌/結核桿菌呈紅色，非抗酸桿菌和背景呈藍色。主要由復紅液、脫色液組成。

儲存條件：室溫，避光，12個月

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

金黃亞種酪蛋白激受體A10抗體Human LCP1 (Plastin-2) 人5羥二十碳四烯(5-HETE)免疫試劑盒

腸膜明串珠菌腸道病71型/手足口病病抗體Human LIG1 (DNA ligase 1) 人5核(5-NT)免疫試劑盒

假單胞菌轉錄因子ELF1抗體Human LCP2 (Lymphocyte cytosolic protein 2) 人5'-AMP活化蛋白激α-2催化亞基(PRKAA2)免疫試劑盒

大腸埃希氏菌酪蛋白激B3抗體Human SEMG2(Semenogelin-2) 人Ⅳ型前膠原基末端肽(PⅣNP)免疫試劑盒

鴨疫里氏桿菌磷化酪蛋白激受體B1+B2抗體Human POMC(Pro-opiomelanocortin) 人Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)免疫試劑盒

農球菌酪蛋白激受體B1+B2+B3+B4抗體Human LYRM1 (LYR motif-containing protein 1) 人4-羥基壬烯(HNE)免疫試劑盒

溶桿菌空通氣孔樣蛋白2抗體Human KMO(Kynurenine 3-monooxygenase) 人40S核糖體蛋白S19(RPS19)免疫試劑盒

微白黃鏈霉菌同源盒蛋白轉錄因子EN2抗體Human LMCD1 (LIM and cysteine-rich domains protein 1) 人Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)免疫試劑盒

糞腸球菌磷化外信號調節(jié)激5抗體Human LRRK1 (Leucine-rich repeat serine/threonine-protein kinase 1) 人Ⅲ型前膠原基末端肽(PⅢNP)免疫試劑盒

平菇CD39樣蛋白1抗體Human LCT (Lactase-phlorizin hydrolase) 人Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)免疫試劑盒

鏈霉菌真核翻譯起始因子5抗體Human LRGUK (Leucine-rich repeat and guanylate kinase domain-containing protein) 人Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)免疫試劑盒

大麗輪枝霉早期B淋巴因子2抗體Human LACE1 (Lactation elevated protein 1) 人Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)免疫試劑盒

魯氏接合酵母ELAVL2蛋白抗體Human TFCP2(Alpha-globin transcription factor CP2) 人Ⅲ型膠原蛋白(COL Ⅲ)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌ELAVL2+ELAVL4蛋白抗體Human IPP (Actin-binding protein IPP) 人Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)免疫試劑盒

白鮑魚菇同源盒蛋白轉錄因子EN1抗體Human LBX1 (Transcription factor LBX1) 人3氧代5α類固4脫氫2(SRD5A2)免疫試劑盒

曲霉轉錄因子ER81蛋白抗體Human PTN(Pleiotrophin) 人3型1-磷鞘受體(S1P3)免疫試劑盒

: ATCC10231資源名稱: 白色假絲酵母質量規(guī)格：分析標準品琥珀

: FRI2008042資源名稱: 嗜蟲沙菌質量規(guī)格：分析標準品三油甘油酯

泡囊側耳Pleurotus│cystidiosus 質量規(guī)格：≥98.0%(HPLC),分析標準品乙酰楊
抗酸染色液(Kinyoun冷染法)pHY300PLK 2-(5-溴吡啶-2-基）2-甲基羧酯

Enterobacter cowanii 4-溴-2,5-二氟乙酰酯

大豆慢生根瘤環(huán)己烷頻那酯神經酰合

釀酒酵母 3,5-二氟-4-甲?；交拾奔?/span>

白蘑 3-[[5-甲基-2-(1-甲基乙基)環(huán)己基]氧]-1,2-β-羥基丁

大腸埃希 2-異氧基-5-溴吡啶幾丁質8受體激

缺陷短波單胞 7-氨基-4-羥基-2-萘磺麥豆球蛋白

沙雷氏 2-苯頻那酯高分子量清蛋白

銀耳、白木耳（可訂購） 4-(芐氧基)苯-1-磺酰麥溶蛋白

產氣腸桿 4,7-二喹啉羥基自由基

小串鏈霉 6--5-硝基喹啉檸檬

破傷風試驗 2-溴-5-三氟甲基芐鎂原卟啉Ⅸ

釀酒酵母 (S)-N-芐氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-5-氨基乙酰

印度農霉 5-疏基-1-苯基-四氮唑唾液

塔賓曲霉 TFA-aa-U醌氧化還原4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)