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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
NADP蘋(píng)果酸脫氫酶(NADPMDH)測(cè)試盒微量法
貨號(hào) | BJ-016113-2 |
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商品介紹:
測(cè)定意義 LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。 測(cè)定原理 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 需自備的儀器和用品 可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | BJ-016113-2 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋?zhuān)簩⒃噭┤谜麴s水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋?zhuān)划?dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
跨膜蛋白TMED4抗體固氮菌COLO 320DM(人結(jié)直腸腺癌)
甲狀腺激素受體相關(guān)蛋白3抗體黃赭色鏈霉菌WI-38(人胚肺)
味覺(jué)受體蛋白家族2亞基9抗體雙孢蘑菇THP-1(人髓系白血病單核)
肥大類(lèi)β2鹿角芝Hep B1.2(人肝癌)
磷酸化激酶B抗體黃青霉NCI-H460(人肺癌)
粘附分子1抗體污黑腐皮殼Ishikawa(人內(nèi)膜癌)
跨膜蛋白16A/鈣激活氯離子通道抗體副豬嗜血桿菌SK-MES-1(人肺鱗癌)
腫瘤壞死因子-α抗體多帶革孔菌NCI-H838(人非小肺癌)
腫瘤蛋白P53誘導(dǎo)蛋白11抗體卡爾斯伯酵母TG-905(人腦膠質(zhì)母瘤)
味覺(jué)2型受體蛋白家族49抗體隆紋黑蛋巢菌NCI-H1975(人肺腺癌)
早期未分化視網(wǎng)膜及晶狀體蛋白EURL抗體葡萄球菌屬WISH(人羊膜)
特異激酶底物蛋白抗體糞腸球菌BGC-803(人胃癌)
微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體勝利油田鹽單胞菌SPC-A-1(人肺癌)
神經(jīng)死亡誘導(dǎo)蛋白激酶抗體脊孢糖多孢菌A2(人腺樣囊性癌)
微管蛋白β tubulin抗體 Tubulin β毛栓菌VCaP(人前列腺癌)
乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法解旋酶樣轉(zhuǎn)錄因子(HLTF)試劑盒Anti-CHEK2 AntibodyPHD指蛋白21A
膽固(CH)試劑盒 Anti-CHI3L1 Antibody富含蛋白11
血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒Anti-CHEK2 Antibody(PB0732)三磷酸腺苷受體受體P2X3
抑瘤素M受體(OSMR)試劑盒Anti-CHM Antibody相關(guān)血漿蛋白A
角蛋白17(CK17/KRT17)試劑盒 Anti-CHM Antibody棕櫚酰蛋白硫酯酶1
乳酸脫氫酶C(LDHC)試劑盒 Anti-CHRM1 Antibody磷酸化
乙酰A乙酰轉(zhuǎn)移酶2(ACAT2)試劑盒 Anti-CHRM1 Antibody核仁同源蛋白17
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