當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法
貨號 | BJ-016114-2 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-016114-2 |
商品介紹:
測定意義: MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。 測定原理: MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測試面廣:可測動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
硫氧還蛋白5抗體北方蜜環(huán)菌IBRS-2(豬腎)
擴(kuò)張型心肌病蛋白1G抗體冷溫木拉克酵母HEC-1-A(人內(nèi)膜腺癌)
TGFB1誘導(dǎo)抗凋亡因子1抗體乳狀原孢酵母EL4(小鼠淋巴瘤)
端粒酶調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白抗體畢赤酵母屬HEC-1-B(人內(nèi)膜腺癌)
腫瘤相關(guān)蛋白抗原L6抗體點(diǎn)柄粘蓋牛肝菌(都不提供)H9c2(2-1) (大鼠心肌)
轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF4抗體殺鮭氣單胞菌日本鮭亞種OK(負(fù)鼠腎小管)
缺氧誘導(dǎo)蛋白HIG1抗體塔賓曲霉HK-2(人腎小管上皮)
Thimet內(nèi)肽酶抗體黑曲霉H4(人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤)
腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白3相互作用蛋白1抗體葡萄汁有孢漢遜酵母PC-3(人前列腺癌)
四連接素TN抗體乳酸鏈球菌P388D1(小鼠淋巴樣瘤)
Toll樣受體1抗體熱帶假絲酵母MSTO-211H(人肺癌)
DNA拓普西異構(gòu)酶ⅡA抗體厚垣鐮孢菌HL-60(人早幼粒急性白血?。?/span>
三葉肽因子2抗體鼠李糖乳桿菌FRhK-4(恒河猴胚腎)
端粒結(jié)合蛋白2抗體枯草芽孢桿菌DU 145(人前列腺癌)
形成相關(guān)凋亡蛋白7抗體米曲霉NRK-52E(大鼠腎小管導(dǎo)管上皮)
NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)紫外分光光度法生長因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10)試劑盒Anti-CHRNA3 Antibody蛋白磷酸酶2C
不均一核糖核蛋白U (HNRPU)試劑盒Anti-CHRNA3 Antibody染色質(zhì)組裝因子1P55
骨成型蛋白受體II(BMPR2)試劑盒 Anti-CHRNA4 AntibodyRNA聚合酶1和轉(zhuǎn)錄釋放因子
原鈣黏素β2(PCDHβ2)試劑盒 Anti-CHRNA5 Antibody磷脂酰脫羧酶PISD
載脂蛋白C2(ApoC2)試劑盒 Anti-CHUK Antibody含patatin樣磷脂酶1
神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒Anti-CIB1 Antibody早幼粒白血病蛋白
粘蛋白4(MUC4)試劑盒Anti-CIC Antibody酪酪肽
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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