當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>輔酶Ⅰ系列>> 檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法
貨號 | BJ-016118-1 |
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商品介紹:
測定意義: CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點之一。 測定原理: CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰fu酶A,進一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。 需自備的儀器和用品: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水 |
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/48樣 | BJ-016118-1 |
測定步驟:
1、 酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A。
注意事項:
待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復凍融會導致SOD部分失活。
一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當分裝,以避免反復凍融導致的檢測效果下降。
標準品稀釋時所用的稀釋液應盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標準品也宜使用SOD樣品制備液進行稀釋;當樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標準品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實驗方法學:
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
優(yōu)點如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗: X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復性強。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
磷酸化x激酶A抗體褐黃鱗銹耳MDCK(犬腎)
磷酸化馬鈴薯球蛋白(結(jié)節(jié)性硬化)抗體黑木耳HT-29(人結(jié)腸癌)
磷酸化非受體酪酸蛋白激酶2抗體尖孢鐮孢K-562(人慢性骨髓性白血病)
磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體葡萄座腔菌HCC827(人非小肺癌)
磷酸化CREB轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC2抗體同絲毛殼FaDu(人咽鱗癌)
酪酸酶相關(guān)蛋白2抗體壯麗假絲酵母Hep G2(人肝癌)
TWIST蛋白抗體江西青霉KG-1(人急性骨髓性白血?。?/span>
磷酸化羥化酶抗體Pseudoclavibacter caeni SrinivasanL6(大鼠成?。?/span>
拓普西異構(gòu)酶Ⅰ抗體土曲霉P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤)
腎小管間質(zhì)腎炎抗原抗體尖孢鐮刀菌I型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)
跨膜蛋白176A抗體血紅密孔菌3T3-L1(小鼠胚胎成纖維)
跨膜蛋白176A抗體巨獸芽孢桿菌木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)
轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體哈茨木霉293T(人胚腎)
tinagl1抗體茶樹菇III型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)
辣椒素受體5抗體斑玉蕈IV型膠原酶(含10mL酶解緩沖液)
檸檬酸合酶(CS)測試盒微量法游離血紅蛋白(f-Hb)試劑盒 Anti-CLK2 Antibody蛋白激酶C zeta
Apelin 17(AP17)試劑盒 Anti-CLPP Antibody嗜酸性粒顆粒關(guān)鍵堿性蛋白
膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5 )試劑盒 Anti-CLPX Antibody胰島素原
果糖二磷酸縮酶C(ALDOC)試劑盒 Anti-CLOCK Antibody原蛋白轉(zhuǎn)化酶4
血栓烷受體(TP/TXA2R)試劑盒Anti-CLPB Antibody膜鈣ATP酶1
性結(jié)合球蛋白(SHBG)試劑盒Anti-CLPX Antibody磷酸烯酮酸羧激酶
C4結(jié)合蛋白(C4BP)試劑盒 Anti-CLPX Antibody多聚合酶α
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