當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 線粒體蘋果酸脫氫酶(MDHm)微量法
貨號 | GOY-01S6585 |
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【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6585 |
商品介紹
測定意義 MDH (EC 1.1.1.37)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,催化蘋果酸形成草酰乙酸;相反,胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物, 連接多條重要的代謝途徑。因此,MDH在細(xì)胞多種生理活動中扮演著重要的角色,包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性,MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH,細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH,在真核細(xì)胞中,NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。 測定原理: MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸,導(dǎo)致340nm處光吸收下降。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。
氫氟酸 ACS二氯乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品HCV-NS1 型肝炎病-NS1(抗原)
氫氟酸 電子級,49wt. % in H2O,≥99.99998%metals basis3,3-二甲基丁酰氯 98%HCV-NS3 型肝炎病-NS3(抗原)
異 standard for GC,≥99.9% (GC) 乙酯 98%HCV-NS4a 型肝炎病-NS4a(抗原)
異 for HPLC, 99.8% 甲酯 99%HEV 戊型肝炎?。乖?/span>
異 農(nóng)殘級, 99.9%三氯乙 98%HGV(Hepatitis G vivus) 庚型肝炎?。乖?/span>
異 用于分子生物學(xué), ≥99.5% (GC)碳酸鈷(II) CP,Co 43.0 - 47.0 %HIV-1(gp41) 艾滋病?。乖?/span>
異 for LC-MS, ≥99.9% (GC)碳酸鈷(II) AR,Co 43.0 - 47.0 %HIV gp120 艾滋病?。乖?/span>
線粒體蘋果酸脫氫酶(MDHm)微量法檢測試劑盒碳鋇-13C 豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥99%氧化固結(jié)合蛋白4抗體C2CD4C/NLF3 限局性核因子3抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5% 抗凋亡蛋白OLFM44抗體C2CD2/C21orf25 21號染色體開放閱讀框25抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5%結(jié)腸癌過度表達(dá)蛋白1抗體C22orf9 22號染色體開放閱讀框9抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5%卵巢癌免疫反應(yīng)抗原抗體C22orf36 22號染色體開放閱讀框36抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5% 卵巢癌相關(guān)因1抗體C22orf31 22號染色體開放閱讀框31抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98%氧化應(yīng)激誘導(dǎo)生長抑制因子1抗體C22orf25 22號染色體開放閱讀框25抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98%氧化固結(jié)合蛋白8抗體C21orf87 21號染色體開放閱讀框87抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5%泛素特異性蛋白OTB1抗體C21orf70 21號染色體開放閱讀框70抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5%視神經(jīng)相關(guān)蛋白1抗體C21ORF62 21號染色體開放閱讀框62抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5%鳥氨脫羧抗1抗體C21orf58 21號染色體開放閱讀框58抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5%嗅覺受體家族5亞1抗體C21ORF56 21號染色體開放閱讀框56抗體
甘氨-15N 豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5%胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體C21orf55/DnaJC28 21號染色體開放閱讀框55抗體
甘氨-15N 豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5%抗體C21orf55/DnaJC28 21號染色體開放閱讀框55抗體
豐度:10atom%;化學(xué)純度:≥98.5%腫瘤/抗原117C21orf2 21號染色體開放閱讀框2抗體
豐度:99atom%;化學(xué)純度:≥98.5%鳥氨脫羧抗2抗體C21orf128 21號染色體開放閱讀框128抗體
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
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