當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>生化檢測試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 丙酮酸脫氫酶(PDH)微量法檢測試劑盒
貨號 | GOY-01S6577 |
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測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)
選擇抗凝的注意點:
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細(xì)閱讀購買說明!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
100管/96樣 | 微量法 | GOY-01S6577 |
商品介紹
測定意義 PDH(EC 4.1.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是丙酮酸脫氫酶復(fù)合體(PDHC)催化丙酮酸氧化脫羧的限速酶,催化丙酮酸脫梭生成-TPP,把糖酵解和三羧酸循環(huán)連接起來。 測定原理 PDH催化丙酮酸脫氫,同時還原WST-8產(chǎn)生黃色物質(zhì),從而導(dǎo)致450nm光吸收的增加。 可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
注意事項:
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時間不夠,可以延長反應(yīng)時間(反應(yīng)時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通??梢允箿y定正常。
Corynebacterium gultamicum轉(zhuǎn)肽檢測試劑盒
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丙酮酸脫氫酶(PDH)微量法檢測試劑盒氫氧化銫,一水 99.9% metals basis犬胰島素(INS)免疫試劑盒化絲裂原活化蛋白激1/2抗體Neurofascin/Nfasc155 神經(jīng)束蛋白155抗體
塑料蓋和墊片,匹配20L鋁桶,φ99.4*32犬胰蛋白原激活肽(TAP)免疫試劑盒酪氨蛋白激受體B4抗體NeuroD1/NEUROD 神經(jīng)分化因子1抗體
2- 98%犬胰蛋白原-1 免疫試劑盒酪氨蛋白激A5受體抗體Neurocan 神經(jīng)粘蛋白抗體
2-溴代異丁 98%犬胰蛋白(trypsin)免疫試劑盒上皮鈉離子通道蛋白γ/γENaC抗體Neurobeachin 蛋白激錨定蛋白抗體
1,2,3,4-丁烷四羧 99%犬一氧化氮(NO)免疫試劑盒癌因ETS2抗體Neurexin 2 軸突蛋白2抗體
3-溴-5- 98%犬葉(FA)免疫試劑盒內(nèi)皮素3抗體Neurexin 1 軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體
二二氨鈀 Pd ≥50% 犬血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)免疫試劑盒化外信號調(diào)節(jié)激5抗體NeuN 神經(jīng)元核抗原抗體
2-乙酯 98%犬血纖蛋白原(Fbg)免疫試劑盒化外信號調(diào)節(jié)激5抗體NEU4 神經(jīng)氨4抗體
溴乙乙酯 98%犬血栓素B2(TXB2)免疫試劑盒外信號調(diào)節(jié)激4抗體Netrin G2 軸突生長誘向因子G2抗體
2-溴丁乙酯 98%犬血栓前體蛋白(TpP)免疫試劑盒腸出血性大腸桿菌埃希氏菌O157:H7抗體Netrin G1 ligand 軸突生長誘向因子G1配體抗體
2-溴已乙酯 99%犬血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)免疫試劑盒化絲裂原活化蛋白激ERK抗體Netrin 4 軸突生長誘向因子4抗體
三化金水溶液 Au 23.5~23.8%犬血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)免疫試劑盒CD312抗體NETO1 腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體
2-溴丁酯 97%犬血清淀粉樣蛋白A(SAA)免疫試劑盒eIF4E結(jié)合蛋白抗體NET1 神經(jīng)上皮轉(zhuǎn)化因1抗體
2-溴已酯 98%犬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)免疫試劑盒化因子受體抗體NET1 去素轉(zhuǎn)運蛋白/神經(jīng)遞質(zhì)去素轉(zhuǎn)運體抗體
2-酯 97%犬血管緊張素轉(zhuǎn)化2(ACE2)免疫試劑盒化因子受體抗體Nestin 巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體
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