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在實(shí)際操作中,凍存原代細(xì)胞要進(jìn)行復(fù)蘇,再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細(xì)胞一般采用快速融化法。以保證細(xì)胞外結(jié)晶快速融化,以避免慢速融化水分滲入細(xì)胞內(nèi),再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細(xì)胞。
凍存細(xì)胞復(fù)蘇的注意事項(xiàng)
(1)從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,但為對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液;
(2)將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí),要做好防護(hù)工作,以免凍傷;
(3)凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。
凍存細(xì)胞復(fù)蘇的操作步驟
(1)佩戴眼鏡和手套,從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
(2)迅速放入 38℃水浴中,并不時(shí)搖動(dòng),在 1 分鐘內(nèi)使其*融化,然后在無菌下取出細(xì)胞。
(3)在 1000r/min速度下離心 5~10 分鐘,棄去上層液,加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中,接種濃度 1×109/L,置 37℃溫箱靜置培養(yǎng),次日 更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng),觀察生長情況。若原代細(xì)胞密度較高,及時(shí)傳代?;驘o需離心直接將細(xì)胞加入瓶中,并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12~24 小時(shí) 后,充去上清,換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
100327-200201 檢查用 50mg 聯(lián)苯芐醇
100330-200101 含量測(cè)定 50mg 萘普生鈉
100331-201002 檢查用 50mg 撲米酮
100332-200001 檢查用 50mg 葡萄糖酸鋅
100333-200201 含量測(cè)定 50mg 曲安西龍
100334-200302 HPLC法含量測(cè)定 100mg 雙氯芬酸鈉
100335-200001 檢查 50mg 舒林酸
100336-200703 含量測(cè)定 100mg 替硝唑
100337-201003 含量測(cè)定 100mg 酮洛芬
100338-200502 含量測(cè)定 100mg 硝苯地平
原代細(xì)胞
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