（一） 原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)選材 常用胚胎動物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認(rèn)為與組織相關(guān)。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質(zhì)聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質(zhì)以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細(xì)胞成活率高，顆粒細(xì)胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。

（二） 取材。腦則取出相應(yīng)組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂板上，用小刀將其要成背腹兩側(cè)，分別培養(yǎng)。

（三） 細(xì)胞分離與接種。神經(jīng)組織用0.125-0.25%胰蛋白酶在37℃孵育30min，移入接種液，停止消化，并洗去胰蛋白酶液，用細(xì)口吸管吹打細(xì)胞懸液，使其充分分散，如此多次，待沉淀后吸出上層細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)，預(yù)置細(xì)胞密度，接種于培養(yǎng)皿（1×106），做電生理應(yīng)為5×105或更低。

（四） 抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長。培養(yǎng)3-5d后，也有人認(rèn)為培養(yǎng)7d后，用阿糖胞苷，或5-FU抑制神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生長。

（五） 觀察。接種6-12h，開始貼壁，并有集合現(xiàn)象，細(xì)胞生長突起明顯，5-7d膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯，7-10d膠質(zhì)細(xì)胞成片于神經(jīng)細(xì)胞下面，形成地毯，2周時神經(jīng)細(xì)胞生長Z豐滿，四周暈光明顯，一個月后，有些神經(jīng)細(xì)胞開始退化，變形，甚至出現(xiàn)空泡，一般培養(yǎng)2-4周Z宜。

但神經(jīng)細(xì)胞只能增大，而不能增殖，只能原代，不能傳代，不會有細(xì)胞周期，而且隨培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞數(shù)量在下降，但膠質(zhì)細(xì)胞可以，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也可以。在培養(yǎng)過程中，早期9-12d時，有較多的神經(jīng)細(xì)胞死亡，這是*次死亡階段，應(yīng)注意保持條件的恒定。在此之后存活下去的細(xì)胞一般突起長而多，且相互形成突觸。

（六） 常用培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)有：FCM的蛋白總量分析；膜片鉗與離子通道的分析；免疫組化分析；

但免疫組化分析應(yīng)注意，由于抗體直接作用于活細(xì)胞，不易穿透活細(xì)胞，故對核內(nèi)抗原定位時，首先考慮膜對抗體的通透性問題。常用化學(xué)試劑以增加其通透性或采用冰凍方法解決。

在免疫組化中，或其它組織學(xué)染色中，常用不同的染色方法以區(qū)分不同原代細(xì)胞，如半乳糖腦苷脂對小樹突膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記明顯；GFAP對星形膠質(zhì)細(xì)胞具有特異性染色等。這對研究神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細(xì)胞功能具有極大的應(yīng)用價值。神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以往多被忽視，其在腦血管疾病（如缺血性損傷）、退行性疾?。ㄈ鏏D、PD）、損傷后膠質(zhì)細(xì)胞的填充等具有不可忽視的作用。它也是神經(jīng)細(xì)胞功能和營養(yǎng)支持的物質(zhì)基礎(chǔ)。

78-27-3 1-乙炔-1-環(huán)己醇 英文名稱： 號： 1-Ethynyl-1-cyclohexanol

17356-19-3 1-乙炔基環(huán)丙醇98+％ 英文名稱： 號： 1-ETHYNYLCYCLOPENTANOL

931-49-7 1-乙炔基環(huán)己烯 99％ 英文名稱： 號： 1-ETHYNYLCYCLOHEXENE

88-12-0 1-乙烯-2-吡咯烷酮 英文名稱： 號： N-Vinyl-2-pyrrolidone

1072-63-5 1-乙烯基咪唑 英文名稱： 號： 1-VinyliMidazole

40235-68-5 1-乙酰氧基-3-氯丙酮 英文名稱： 號： 1-ACETOXY-3-CHLOROACETONE

4532-96-1 1-異丙基咪唑 英文名稱： 號： 1-Isopropylimidazole

6158-45-8 1-異丙基萘(+4℃) 英文名稱： 號： 1-ISOPROPYLNAPHTHALENE
原代細(xì)胞