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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>熒光定量PCR>> 小鼠線粒體DNA通用探針法熒光定量PCR試劑盒
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:小鼠線粒體DNA通用探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光定量PCR
貨號(hào):CP100898
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
硝呋太爾(標(biāo)準(zhǔn)品)Nifuratel質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 人軍團(tuán)菌抗體IgA(LP Ab-IgA)試劑盒 Human Legionella aibody IgA,LP Ab-IgA ELISA Kit 人細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
氧化硒(>98%,Pract Grade)Selenium (IV) oxide質(zhì)量規(guī)格:>98%,Pract Grade RatActivinA,ACV-AELISAKit大鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 豬環(huán)1酸腺苷(cAMP)試劑盒 Pig cyclic adenosine monophosphate,cAMP ELISA Kit
芝麻酚(>98%,BC)Sesamol質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC 載玻片細(xì)胞TNFALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 Humanansforminggrowthfactorα,TGF-αELISAKit 人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α(TGF-α)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
粗孔柱層析硅膠(20-60目,FCP Grade)Silica gel for column chromatography質(zhì)量規(guī)格:20-60目,層析用 Mouse16-αHydroxyesogen1,16-αOHE-1ELISA試劑盒小鼠16α羥基雌同1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humanmyogenin,MYOGELISA試劑盒人肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
四丁銨雙(馬來腈基二硫醇)鎳(Ⅲ)絡(luò)合物(>90.0%(T))Tetrabutylammonium Bis(maleonitriledithiolato)nickel(III) Complex質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(T) 犬甘油-3-1酸脫氫酶(GAPDH)試劑盒 Dog Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH ELISA kit 人衰變加速因子(DAF/CD55)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小白菊內(nèi)酯Parthenolide質(zhì)量規(guī)格:0.8%內(nèi)酯含量,BR 英文名稱HumanMotilinELISAKit人胃動(dòng)素(MTL)規(guī)格:96T/48T 小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)試劑盒 Mouse ansforming growth factorβ2,TGFβ2 ELISA Kit
小白菊內(nèi)酯Parthenolide質(zhì)量規(guī)格:>98%標(biāo)準(zhǔn)品 大量全血基因組DNA化試劑盒10 豬乙型腦炎病毒(JEV)核酸檢測(cè)試劑盒(-PCR法) 48T
利扎曲坦Rizatriptan質(zhì)量規(guī)格:>98% RatIerleukin6,IL-6ELISA試劑盒大鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanPhospholipaseCγ1,PLCγ1ELISA試劑盒人1酯酶Cγ鏈(PLCγ1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠線粒體DNA通用探針法熒光定量PCR試劑盒腸道病毒70型熒光PCR法檢測(cè)試劑盒
腸道病毒68型熒光PCR法檢測(cè)試劑盒
柯薩奇病毒A16型熒光PCR法檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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