實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無(wú)菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無(wú)菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無(wú)菌的剪刀和鑷子切開(kāi)腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無(wú)菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無(wú)菌的含有無(wú)菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦大鼠膀胱成纖維細(xì)胞的詳細(xì)說(shuō)明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

鹽還原試劑基脲 97%沙門氏菌成套生化鑒定管pUNO1-hHSPB8

乳糖-明膠培養(yǎng)基基脲 98%改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（mTSB）pUNO1-hICAM1

乳糖-明膠培養(yǎng)基N-脲 97%萘啶酮酸2.25mgpUNO1-hICEBERG

硫醇酸鹽流體培養(yǎng)基間苯二酸二酯-5-磺酸鈉 98%酪蛋白瓊脂平板pUNO1-hID1a

菌種培養(yǎng)基環(huán)基胺 98%甘露醇卵黃培養(yǎng)基（顆粒）pUNO1-hID2

培養(yǎng)基5,5-二基-1-吡咯啉-N-氧化物 97%含225ml胰蛋白胨稀釋液pUNO1-hID3

四環(huán)素族檢定培養(yǎng)基N-對(duì)苯磺酰甘氨酸 98%液體菌種保存管pUNO1-hID4

溶菌酶多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)阿斯巴甜 98%CPC瓊脂基礎(chǔ)pUNO1-hIFI16

多粘菌素 B（300IU/ml）N-酰-D-氨基葡萄糖 98%CPC瓊脂添加劑pUNO1-hIFIT1

溶菌酶（2000 萬(wàn) IU/g)N-酰-D-氨基葡萄糖 97%含225ml蛋白胨-NaCl-纖維二糖（PNC）肉湯均質(zhì)袋pUNO1-hIFIT2

大鼠膀胱成纖維細(xì)胞三二醇 97%慶大藥敏實(shí)驗(yàn)紙片（擴(kuò)散法） CN 10ug酰左旋肉堿鹽酸鹽Rat SGLT2(Sodium/glucose cotransporter 2) ELISA Kit

Rat NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit

三二醇 75℃＋＋＋卡那 K 30ug頭孢唑肟鈉Rat -3(Neurotrophin 3) ELISA Kit

Rat PDGF-AB(Plaet-Derived Growth Factor AB) ELISA Kit

三二醇 CP林可 2ug氨芐西林（氨芐青）Rat Rantes(Regulated On Activation, Normal T-Cell Expressed and Secreted) ELISA Kit

Rat GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit

三二醇 99%米諾環(huán)素藥敏實(shí)驗(yàn)紙片（擴(kuò)散法） MH 30ug交聯(lián)羧基纖維素鈉Rat TGFBI(Transforming Growth Factor Beta Induced Protein) ELISA Kit

Rat TGF-β2(Transforming Growth Factor Beta 2) ELISA Kit

三縮四二醇 99%新N 30ug夫西地酸Rat TGF-β3(Transforming Growth Factor Beta 3) ELISA Kit

Rat TIMP-1(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 1) ELISA Kit

腈 >99.5%(GC)呋喃妥因 F 300ug煙酰胺腺嘌呤二核苷酸Rat TIMP-2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit

Rat CSNK2B(Casein kinase II subunit beta) ELISA Kit

二二醇 CP新生 NV 5ug基環(huán)戊烯醇酮Rat VEGF(Vascular Endothelial cell Growth Factor) ELISA Kit

Rat Alb(Serum albumin) ELISA Kit

一縮二二醇 >99%(GC)青藥敏實(shí)驗(yàn)紙片（擴(kuò)散法） P 10ug二基-β-環(huán)糊精Rat Afp(Alpha-fetoprotein) ELISA Kit

Rat Prl(Prolactin) ELISA Kit

二醇 Standard for GC,≥99.5%多粘菌素B PB 300ug對(duì)溴苯烯Rat Tshb(Thyrotropin subunit beta) ELISA Kit

Rat BMP-4(Bone morphogenetic protein 4) ELISA Kit

二醇 AR,98%鏈 S 10ug復(fù)合酵素Rat IGFBP-1(Insulin-like growth factor-binding protein 1) ELISA Kit

Rat IGFBP-2(Insulin-like growth factor-binding protein 2) ELISA Kit

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。