XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒1000T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測(cè)組織樣本。
產(chǎn)品名稱(chēng)：XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒1000T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件： 2-8℃避光保存。*存放-20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用二甲氧唑黃2,3-bis[2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazoliumhydroxide快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。XTT在電子耦合試劑存在的情況下能夠被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線(xiàn)性關(guān)系。

XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒1000T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請(qǐng)?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀(guān)察和檢測(cè)。
A．熒光顯微鏡觀(guān)察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀(guān)察激發(fā)波長(zhǎng)546nm，發(fā)射波長(zhǎng)647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=546 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測(cè)。
XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒1000T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過(guò)度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過(guò)度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
國(guó)槐Sophora japonica Robinetin 洋槐黃素 490-31-3 C15H10O7 ≥96%

仙鶴草酚BcgrimopholB10mg/支

花前胡醇 Peucedanol 28095-18-3 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

中藥對(duì)照藥材廣天仙子121478-200401TLC法鑒別

WITHANOLIDE A 睡茄素A純度：>95%
145781-92-6 醋酸戈舍瑞林標(biāo)準(zhǔn)品(避光)，(+4℃,+4℃) 100mg

聚炳烯醋銨酯IIPolymetxylammoniumacrylateesterII200mg

Pellitorine 墻草減 18836-52-7

Allantoin*標(biāo)準(zhǔn)品97-59-6200mg*標(biāo)準(zhǔn)品

知母皂苷BIII 142759-74-8 HPLC≥98%;10mg 訂購(gòu)|咨詢(xún)
鼠尾草 Salvia sp. wo7ium Dahshensu 丹參素鈉 67920-52-9 C9H9O5Na ≥98%

原花青速Procnthocycnidins20mg/支

茯苓酸 Pachymic acid 29070-92-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測(cè)定

L-*100758-常溫，避光30mg

Bicalutamide*標(biāo)準(zhǔn)品90357-06-5200mg
新戊二醇shēng huà shì jì容量：RT，避光5克

22644-28-6(R)-(+)-2-甲基-(R)-2-metxyl-9,4-putene7iol

鹽酸乙二，英文名或英文縮寫(xiě)：etxylenediamine dixy7nochloride，級(jí)別：BR，規(guī)格：500克

化鉛 lead fluoride 7783-46-2 25G 通用試劑

1-癸烯 1-Decene,≥97.0% 872-05-9 25ML 通用試劑
3-叔丁基-4-羥基本甲醚shēng huà shì jì容量：2～8℃100克

(*)

沙門(mén)氏志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基5克RT

側(cè)金盞花醇;啊東糖醇;務(wù)五醇;福壽草醇;側(cè)金盞(務(wù))糖醇;核糖醇 cdonitol;Ribitol 488-81-3

4--1-酚 4-Chloro-1-naphthol (≥98%, 4CN) 604-44-4 5G 核酸衍生物
XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒1000T實(shí)驗(yàn)方法Ammoniumfluotitanate六扶鈦(IV)酸100克AR，90%

5350-41-4芐基*基*;三*BenzyltrimetxylaMMoniuM broMide;TrimetxylbenzylaMMoniuM broMide

Pentaerythritol四羥甲基烷100克AR，97%

乙基化 Ethyl Chloride 2386-64-3 100ML 通用試劑

L-色酸 L-Tryptophan (cell culture tested, ≥9... 73-22-3 25G 基