一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹：

一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái)，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
CM-R053大鼠卵巢上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠顆粒細(xì)胞RGC

NCI-H1703[H1703]細(xì)胞，人肺癌細(xì)胞 人膀胱癌細(xì)胞,5637(HTB-9)細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞HRPEpiC

貂源細(xì)胞

MMP7 Others Human 人 MMP7 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
IL12A Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞cDNAHSkMSC cDNA

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5 *(含100mL 酶解緩沖液) 10mL

細(xì)胞名稱 種屬

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞cDNAHSkMSC cDNA

IL12A Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-3C8

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A5 *(含100mL 酶解緩沖液) 10mL

細(xì)胞名稱 種屬

AGER Others Human 人 AGER / RAGE 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Anti-TPH /FITC 熒光素標(biāo)記*羥化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

*羥化酶抗體 Anti-TPH 0.2ml

SORCS1 英文名稱： 液泡蛋白分選受體SORCS抗體 0.2ml

EMSY 英文名稱： EMSY蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023) 磷酸化蛋白質(zhì)*激酶JAK-1抗體 規(guī)格 0.1ml

BOb-1(B-cell oct-binding protein 1) B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml

Phospho-FoxO3a (Ser253) 英文名稱： 磷酸化叉頭蛋白3A抗體 0.1ml

兔抗D型產(chǎn)氣莢膜梭菌抗體 anti-Clostridium perfringens type D 0.2ml

Anti-P27/kip1/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PIM3 */*蛋白激酶PIM3抗體 規(guī)格 0.2ml

human-HSA/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記人血清白蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
一站式 miRNA 尿素 -PAGE 電泳套裝30 次實(shí)驗(yàn)PINP 小鼠I型前膠原肽Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-MKP1 (Ser359) 磷酸化原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MTA2 轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格 0.2ml

cFn(Human cellular fibronectin) ELISA kit 人細(xì)胞纖維連接蛋白 96T

STAC2 英文名稱： STAC2蛋白抗體 0.1ml

CD133 英文名稱： 造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 0.1ml

Anti-Phospho-MKP1 (Ser359) 磷酸化原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml