操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
500T | FS-X9717 |
產(chǎn)品介紹:
熒光染料PKH26 是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料,可以標(biāo)記活體細(xì)胞,通過(guò)與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分子結(jié)合而標(biāo)記細(xì)胞。對(duì)細(xì)胞毒性較小,熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透細(xì)胞膜,有著強(qiáng)而穩(wěn)定的紅色熒光。 在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中,PKH26的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減,標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半,根據(jù)這一特性,它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖,細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。PKH26標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一,并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中,PKH26標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中,熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半,通過(guò)流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同,可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞,分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度),二次(1/4的熒光強(qiáng)度),三次(1/8的熒光強(qiáng)度),以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH26可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)六次甚至更多。經(jīng)PKH26標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究,且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。 PKH26標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久,它常被用來(lái)做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH26 毒性較小,不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單,且不用放射性同位素,不存在安全隱患。可以更快速,更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 PKH26標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。 PKH26標(biāo)記細(xì)胞呈紅色熒光,熒光波長(zhǎng):λex=551 nm,λem=567 nm。 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存。 有效期:一年。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)英文名:SP-B 芳香基硫酯家族蛋白1抗體包裝1g
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)英文名:SP-A 腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMX抗體包裝5g
肺表面活性蛋白D(SP-D)英文名:SP-D 精神分裂癥與犰狳重復(fù)基因抗體包裝1g
肥大細(xì)胞類(MCT)英文名:MCT 乙脫氫1型抗體包裝25g
肥大/干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(Kit/Sl/CD117)英文名:Kit/Sl/CD117 磷化乙酰羧化抗體包裝5g
芳香(ARO)英文名:ARO 磷化乙酰羧化抗體包裝100g
泛蛋白(Ub)英文名:Ub 磷化腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體包裝25g
二?;视?/span>(DAG/DG)英文名:DAG/DG 磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝500g
二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)英文名:DPPⅣ 磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝1g
二胺氧化(DAO)英文名:DAO 磷化乙酰羧化抗體包裝5g
兒茶酚抑(CAT)英文名:CAT 膜粘連蛋白6抗體包裝100mg
兒茶酚胺(CA)英文名:CA 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體包裝500mg
多萜長(zhǎng)二磷寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移(DDOST/OST-48)英文名:DDOST/OST-48 胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝25MG
多肽YY(PYY)英文名:PYY 腺病5結(jié)合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關(guān)分子1)包裝5MG
多巴胺D1受體(D1R)英文名:D1R 載脂蛋白A1抗體包裝1g
銜接蛋白α-Adaptin抗體結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)3-Methyladenine (3-MA) is a selective PI3K inhibitor for Vps34 and PI3Kγ with IC
PKH26細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒異常畢赤酵母 2,3,4,5-四氟苯甲環(huán)氧合1
釀酒酵母 2-氨基-4,6-二苯并噻唑環(huán)氧合2
利尻鏈霉 4-(2-Boc-氨乙基)環(huán)指蛋白180
大腸埃希氏 全氟辛基季化物環(huán)指蛋白213
果生鏈核盤(pán) 4,7-雙(噻吩-2-基)苯并[C][1,2,5]噻二唑緩激肽
膨大彎頸霉 3-溴-N,N-二緩激肽受體B2
中孢短芽孢桿 1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]脫氫
類志賀鄰單胞 4--2,6-二氟氧化還原
類干酪乳桿類干酪亞種 3-氨基-4-溴吡唑氧化
綠色鏈霉 乙二二鄰羥苯基大乙酸鐵鈉活化蛋白C
大豆根瘤 3-甲氧基-4-活化Ⅻ
羽扇豆根瘤 4-基-2-氟苯酸活化Ⅻ
黃曲霉 2,2-二甲基-4-戊烯酸活化X
綠色木霉 2-氨基-4,6-甲氧基-1,3,5-三活化
美澳型核果褐腐病 2--4-苯基煙活化