Caspase-5活性測(cè)定試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品：CD2 CD2抗體G 95%
SLAMF9/CD2F-10 CD2F-10抗體G ，用于食品分析，≥97.0% (HPLC)
SLAMF9 CD2F-10抗體二胂鈉
CD3 CD3抗體二二硫代氨鈉 98%
Bcr Bcr抗體三氟磺鈧 98%
Phospho-Bcr(Tyr177) 化T淋巴受體抗體氫二鈉,二水 for HPLC, ≥99
中文名稱：Caspase-5活性測(cè)定試劑盒
英文名稱：Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit
產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T
貨號(hào)：FS-X9736
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于測(cè)定哺乳動(dòng)物組織、細(xì)胞caspase-5活性。試劑盒測(cè)定原理基于Caspase-5特異水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA)，釋放出游離的硝基pNA，后者呈黃色在405nm具有大吸收峰，用可見光分光光度比色方法測(cè)定，吸光度值對(duì)應(yīng)于Caspase-5的水解活性。 細(xì)胞凋亡屬于程序化細(xì)胞死亡，可見于各種器官和細(xì)胞，在正常發(fā)育、生理、病理過程中對(duì)細(xì)胞和器官的穩(wěn)態(tài)具有十分重要的調(diào)節(jié)作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含10多個(gè)成員。Caspase-5分子量47.7kD，與ICE有51%的同源性，在過量表達(dá)時(shí)可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生。 所需儀器：酶標(biāo)儀與96孔酶標(biāo)板；或可見光分光光度計(jì)配100μl容積的石英比色杯。 工作波長(zhǎng)：大吸收波長(zhǎng)405nm，如不具備也可在400～450nm范圍內(nèi)測(cè)定。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
DAB2互作蛋白(DAB2IP)英文名：DAB2IP 磷化癌易感基因1抗體包裝100mg
C型鈉尿肽(CNP)英文名：CNP 磷化癌易感基因1抗體包裝25mg
C肽(C-Peptide)英文名：C-Peptide 磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體包裝1g
C反應(yīng)蛋白(CRP)英文名：CRP 磷化B-Raf抗體包裝5g
CXC趨化因子受體4(CXCR4)英文名：CXCR4 癌易感基因相互作用蛋白1抗體包裝500g
CXC趨化因子受體3(CXCR3)英文名：CXCR3 磷化癌易感基因相互作用蛋白1抗體包裝100g
CXC趨化因子配體16(CXCL16)英文名：CXCL16 磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝500g
CXC趨化因子13(Cxcl13/Blc/Scyb13)英文名：Cxcl13/Blc/Scyb13 磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝1g
CD8分子(CD8)英文名：CD8 磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝1g
CD4分子(CD4)英文名：CD4 磷化B-Raf抗體包裝1g
CD45分子(CD45)英文名：CD45 磷化B-Raf抗體包裝25g
CD44分子(CD44)英文名：CD44 磷化Bcl-xL蛋白抗體包裝5g
CD3分子(CD3)英文名：CD3 高表達(dá)神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體包裝1g
CD34分子(CD34)英文名：CD34 B遷移基因4抗體包裝25g
CD33分子(CD33)英文名：CD33 BCL2相互作用蛋白質(zhì)抗體包裝5g
血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體肝核因子1β(HNF1β)Deltarasin is a small molecular inhibitor of KRAS-PDEδ interaction with Kd of 38
Caspase-5活性測(cè)定試劑盒*正紅菇 5-溴-2-甲酯類固5α還原2
豬丹絲 2-基吡類趨化因子受體CMLR1
密蘇里游動(dòng)放線 (S)-2-甲基吡咯烷鹽酸鹽類胰蛋白
粉紅單端孢霉 3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸冷球蛋白
釀酒酵母 N-Boc-3-甲基-4-酮冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白
蠟狀芽孢桿 3-溴-4-吡啶鹽酸鹽利什曼原蟲抗體
根瘤 4-氟-D-苯氨酸粒集落激因子
腸沙門氏腸炎亞種 硫酸原黃粒巨噬集落激因子
面粉增白劑速測(cè)卡 6-溴-2-喹啉連接蛋白-1
桔橙鏈霉 1,7-二旋氧雜［5.5］十一烷鏈激
Pilidium concavum 4-氟-3-甲酸甲酯亮氨肽
藻渣梭 4-氟-2-甲酸甲酯酸腦啡肽
煙曲霉 2-(4-甲基-1-哌)苯磷酸苷油酸脫氫
黑色小單孢 3,4-二芐氧基磷酸果糖激
莖生擬莖點(diǎn)霉 4-三乙氧硅基聯(lián)苯磷酸化AKT蛋白
