2XRAPA HiFi PCR Mix

商品屬性：

商品介紹：

 RAPA HiFi DNA 聚合酶，其來源于高保真 DNA 聚合 酶，并加入了增強的延伸結構，使其具有超保真性能（~280 倍 Taq）、長片段擴增能力、高產量。長片段擴增能力，使用 該酶可輕松擴增 8kb 的基因組 DNA、20kb 的λDNA、8kb 的 cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強 3’-5’的外切酶活性，產物為平末 端。

特點和用途

(1) 超保真擴增：~280 倍 Taq 的保真性能，是載體構建、點突變、NGS 模板擴增、基因合成的最佳用酶。

(2) 快速擴增：具有 6kb/min 的擴增能力。

(3) 長片段擴增：質粒、λDNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb，基因組可以有效擴增>8 kb，cDNA 可以有效擴增>8kb。

儲存：長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。

使用方法

1. 按下表配制反應體系并混合均勻：

2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl

上游引物(10 μM) 1 μl

下游引物(10 μM) 1 μl

模板 DNA 1-250 ng

ddH2O up to 25 μl

*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應體系)

5-250 ng Genomic DNA

 0.1-10 ng Plasmid DNA

 1-2 μl cDNA from RT reaction

2. PCR 擴增循環(huán)參數(shù)

（1）擴增片段<5kb 時采用如下程序

循環(huán)數(shù) 溫度 時間

1

st Cycle 95°C 1min

25-35 Cycles

95°C 30s

50~60°C 30s

72°C 6kb/min

Last Cycle 72°C 2min

（2）擴增片段>5kb 時采用如下程序

循環(huán)數(shù) 溫度 時間

1st Cycle 92°C 1min

25-35 Cycles

92°C 10s

50~60°C 30s

72°C 2-3kb/min

Last Cycle 72°C 2min

3. 電泳：1% 瓊脂糖凝膠電泳，上樣 5 μl，電泳結束在紫外燈下檢測條帶。

4. 注意事項：（1）當模板 GC 含量>65%時，請?zhí)砑?× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。（2）當擴增片段<1kb 時，延伸時間可直接使用 15s，當擴增片段>5kb 時，按照2-3kb/min 的延伸時間進行設置，能獲得更高的產量。（3）由于不同的 PCR 管其導熱性能有所不同，通常 PCR 采用25μl 體系可以獲得更高的產量。

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