當前位置:上海邦景實業(yè)有限公司>>pcr相關(guān)試劑>>PCR相關(guān)>> 2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)
產(chǎn)地 | 國產(chǎn) | 加工定制 | 否 |
---|---|---|---|
適用領(lǐng)域 | 科研 | 貨號 | BJ-PJ6587 |
規(guī)格 | 1ml、10ml | 包裝 | 盒 |
用途 | 僅供科研研究實驗 |
2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye)
商品屬性:
產(chǎn)品分類 | 規(guī)格 | 貨號 |
PCR相關(guān) | 1ml | BJ-PJ6587 |
PCR相關(guān) | 10ml | BJ-PJ6587 |
商品介紹:
RAPA HiFi DNA 聚合酶,其來源于高保真 DNA 聚合 酶,并加入了增強的延伸結(jié)構(gòu),使其具有超保真性能(~280 倍 Taq)、長片段擴增能力、高產(chǎn)量。長片段擴增能力,使用 該酶可輕松擴增 8kb 的基因組 DNA、20kb 的λ DNA、8kb 的 cDNA。該酶具有 6kb/min 以上的延伸速度。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、強 3’-5’的外切酶活性,產(chǎn)物為平末 端。該制品中已經(jīng)含有溴酚藍染料,PCR 擴增完畢后可直接 點樣于瓊脂糖凝膠,無需再加入 DNA Loading Buffer。
特點和用途
(1) 超保真擴增:~280 倍 Taq 的保真性能,是載體構(gòu)建、點突變、NGS 模板擴增、基因合成的最佳用酶。
(2) 快速擴增:具有 6kb/min 的擴增能力。
(3) 長片段擴增:質(zhì)粒、λDNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb,基因組可以有效擴增>8 kb,cDNA 可以有效擴增>8kb。
儲存:長期儲存置于-20°C 以下,可保存 2 年;短期使用置于 4°C(3 個月)保存。
使用方法
1. 按下表配制反應(yīng)體系并混合均勻:
2×RAPA HiFi PCR Mix 12.5 μl
上游引物(10 μM) 1 μl
下游引物(10 μM) 1 μl
模板 DNA 1-250 ng
ddH2O up to 25 μl
*模板 DNA 用量參數(shù)(25 μl 反應(yīng)體系)
5-250 ng Genomic DNA
0.1-10 ng Plasmid DNA
1-2 μl cDNA from RT reaction
2. PCR 擴增循環(huán)參數(shù)
(1)擴增片段<5kb 時采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時間
1st Cycle 95°C 1min
25-35 Cycles
95°C 30s
50~60°C 30s
72°C 6kb/min
Last Cycle 72°C 2min
(2)擴增片段>5kb 時采用如下程序
循環(huán)數(shù) 溫度 時間
1st Cycle 92°C 1min
25-35 Cycles
92°C 30s
50~60°C 30s
72°C 2-3kb/min
Last Cycle 72°C 2min
3. 電泳:1% 瓊脂糖凝膠電泳,上樣 5 μl,電泳結(jié)束在紫外燈下檢測條帶。
4. 注意事項:(1)當模板 GC 含量>65%時,請?zhí)砑?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>5× Q-Solution(Cat. No.: A3002)。(2)當擴增片段<1kb>5kb 時,按照2-3kb/min 的延伸時間進行設(shè)置,能獲得更高的產(chǎn)量。(3)由于不同的 PCR 管其導(dǎo)熱性能有所不同,通常 PCR 采用25μl 體系可以獲得更高的產(chǎn)量。
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