細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系    

產(chǎn)品規(guī)格：100ml/500ml

貨號：FS-01X9980

保存溫度（℃）：2-8℃/-20℃

運輸溫度（℃）：2-8℃/-20℃   

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

注意事項：

 Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)胰淀(IAPP)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Ribonuclease A3 (RNASE3)核糖核A3(RNASE3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 TATA Binding Protein (TBP)TATA盒結(jié)合蛋白(TBP)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Tumor Necrosis Factor Alpha (TNFa)腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Colony Stimulating Factor 2, Granulocyte Macrophage (GMCSF)粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Myeloid Differentiation Factor 88 (MyD88)髓分化因子88(MyD88)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1 (FDFT1)法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移1(FDFT1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 T-Cell Leukemia/Lymphoma Protein 1A (TCL1A)T-細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白1A(TCL1A)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Glycocalicin (GC)糖盞蛋白(GC)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Kruppel Like Factor 5, Intestinal (KLF5)Kruppel樣因子5(KLF5)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Frizzled Homolog 8 (FZD8)卷曲同源物8(FZD8)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Signal Transducer And Activator Of Transcription 1 (STAT1)信號傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子1(STAT1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Transforming Growth Factor Beta 3 (TGFb3)轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGFβ3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Protein Kinase B Beta (PKBb)蛋白激Bβ(PKBβ)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Interleukin 2 Receptor Alpha (IL2Ra)白介2受體α(IL2Rα)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Mitogen Activated Protein Kinase Kinase 6 (MAP2K6)絲裂原激活蛋白激激6(MAP2K6)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Serum/Glucocorticoid Regulated Kinase 2 (SGK2)血清/糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激2(SGK2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T

 Surfactant Associated Protein D (SPD)表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
原代B淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體系FBXO38  F-box蛋白38抗體規(guī)格: 0.2ml

COPS4  信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基4抗體規(guī)格: 0.2ml

COPS7A  信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基7A抗體規(guī)格: 0.2ml

COPS2/TRIP15  甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體規(guī)格: 0.2ml

GPS1/CSN1  G蛋白通路抑制蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

Cullin 7  泛連接CUL7蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

CDCA7  細(xì)胞分裂周期相關(guān)蛋白規(guī)格: 0.2ml

ASB12  含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號抑制物盒蛋白家族12抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。