線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9733

產(chǎn)品介紹:

用途：

細(xì)胞凋亡的生物化學(xué)分析，線粒體膜電位檢測(cè)

注意事項(xiàng)：

主要由JC-10染料儲(chǔ)存液，JC-10 buffer、CCCP等組成，可以檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位，采用FACS檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月

中文名稱：線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10法)

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9733

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

Tau蛋白(TAU)英文名：TAU 溴脫氧尿苷抗體包裝5g

Slit2(Slit2)英文名：Slit2 B遷移基因2抗體包裝1g

SCAF11蛋白(SFRS2IP/P11)英文名：SFRS2IP/P11 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2抗體包裝250mg

S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)英文名：S100A8/A9 骨形態(tài)發(fā)生蛋白7抗體包裝1g

S100蛋白(S-100)英文名：S-100 β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝10MG

S100-B蛋白(S100B)英文名：S100B β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝250mg

S100B蛋白(S100B)英文名：S100B 癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體包裝1g

RAR的相關(guān)孤獨(dú)受體C(RORC)英文名：RORC 血型抗原前體蛋白抗體包裝5g

Qa淋巴細(xì)胞抗原2(Qa-2)英文名：Qa-2 凱爾血型糖蛋白CD238抗體包裝1g

P選擇糖蛋白配體1(PSGL-1)英文名：PSGL-1 嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2抗體包裝250mg

P選擇(P-Selectin/CD62P)英文名：P-Selectin/CD62P 骨形態(tài)發(fā)生蛋白10抗體包裝250mg

P物質(zhì)受體(SP-R)英文名：SP-R 溴脫氧尿苷單克抗體（增殖標(biāo)志物）包裝1g

P物質(zhì)(SP)英文名：SP BEND2蛋白抗體包裝25g

P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)英文名：P-gp 骨涎蛋白包裝5g

p53(p53)英文名：p53 副溶血性弧菌菌體鞭毛蛋白抗體包裝1g

血管緊張Ⅱ受體2抗體肝核因子1α(HNF1α)Capadenoson (BAY 68-4986) is a new adenosine A1 receptor agonist.
線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-10法)Salinicoccus alkaliphilus 4-氟-3,5二可溶性肝X受體

Pilidium concavum 5-氟-2-甲氧基-4-嘧啶可溶性共激分子4

金頂側(cè)耳(榆黃蘑) N-4-BOC-哌-2-乙酸甲酯可溶性核因子κB受體活化因子配基

褐球固氮 (R)-3-(甲基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1

釀酒酵母 -3-乙酸甲酯可溶性瘦受體

竹喙球 6-溴-2-苯并噁唑酮可溶性髓系觸發(fā)受體-1

釀酒酵母異鈮 w/v in isopropanol/hexane (50:50), 99% (metal可溶性糖蛋白130

粉肉色杯傘 2-[4-(2-吡啶基)芐基]-肼羧酸叔丁酯可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體

越南芽孢桿 3-溴-2-羥基-4-可溶性間粘附分子1

腸球?qū)?/span> 2-甲?？扇苄孕剀占?

互生枝頂孢 3-甲可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1

解鳥(niǎo)拉烏爾 2-三氟甲氧基芐溴可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體

香菇 2-溴-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙酮可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1

腐皮鐮孢 2-環(huán)戊基-2-羥基甲酯可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2

大腸埃希氏 2-氨基-4,5-雙(2-甲氧基乙氧基)鹽酸鹽可溶性血管內(nèi)皮粘附分子1

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