Annexin V-APC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9699

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
Annexin V-APC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒		50T\|100T	FS-X9699

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品背景：

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。

在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨suan(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨suan(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。在體內(nèi)，巨噬細(xì)胞可以識(shí)別翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細(xì)胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應(yīng)，而在細(xì)胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應(yīng)。

AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS 高親和力特異性結(jié)合。PS 外翻發(fā)生在細(xì)胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關(guān)蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結(jié)合成為凋亡早期的一種重要檢測(cè)標(biāo)志事件。

檢測(cè)原理：

在正常的活細(xì)胞中，磷脂酰絲氨suan(phosphotidylserine，PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在早期凋亡的細(xì)胞中，PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。

Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結(jié)合?？赏ㄟ^細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。用標(biāo)記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。細(xì)胞壞死的過程中也會(huì)發(fā)生細(xì)胞膜損傷，壞死的細(xì)胞會(huì)結(jié)合Annexin V-APC。

Annexin V-APC 通常與細(xì)胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測(cè)凋亡細(xì)胞。常用的染料是PI。正常細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完整的，核酸染料PI 不能透過完整的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和壞死細(xì)胞，PI 能夠透過細(xì)胞膜與細(xì)胞核結(jié)合呈現(xiàn)紅色。

PI/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞以及死細(xì)胞區(qū)分開來。壞死細(xì)胞可以同時(shí)與Annexin V-APC和PI 結(jié)合顯色，而PI 則被排除在活細(xì)胞(APC陰性)和早期凋亡細(xì)胞(APC陽(yáng)性)之外。

Annexin V-APC 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒可以方便快捷的檢測(cè)凋亡細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。

儲(chǔ)存條件：染色液2-8℃避光保存；結(jié)合液2-8℃保存；

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

免疫球蛋白A(IgA)英文名：IgA 磷化促腎上腺皮質(zhì)激ACTH抗體包裝25mg

輪狀病毒(RV)抗原(Ag)英文名：Ag 磷化蛋白激AKT1抗體包裝25g

卵清蛋白特異性IgG(OVA sIgG)英文名：OVA sIgG 磷化蛋白激B抗體包裝1g

卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)英文名：OVA sIgE 磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝100g

卵泡抑(FS)英文名：FS 磷化內(nèi)收蛋白a1抗體包裝25g

硫氧化還原蛋白(Trx)英文名：Trx 磷化腺苷單磷活化蛋白激α1抗體包裝1g

硫氧還蛋白還原(TrxR)英文名：TrxR 磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝250mg

磷脂酰絲(PS)英文名：PS 性神經(jīng)酰1抗體包裝1g

磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)英文名：PI Ab-IgG/IgM 粘附調(diào)節(jié)分子1抗體包裝1g

磷脂酰肌蛋白聚糖3(GPC-3)英文名：GPC-3 氣味結(jié)合蛋白抗體包裝5g

磷脂D2(PLD2)英文名：PLD2 乙脫氫2抗體包裝1g

磷脂A2(PL-A2)英文名：PL-A2 膜粘連蛋白10抗體包裝1g

磷脂肌3激(PI3-K)英文名：PI3-K 前梯度同源蛋白2抗體包裝250mg

磷腺苷(cAMP)英文名：cAMP 乙脫氫5抗體包裝100g

磷烯式羧激(PCK)英文名：PCK 通用轉(zhuǎn)錄因子IIA樣因子抗體包裝25g

ATP結(jié)合蛋白家族7抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
Annexin V-APC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒白僵 2,3-二甲氧基成熟促進(jìn)因子

卡卡杜兒玉氏酵母苯甲酰甲酸甲酯成纖維活化蛋白

釀酒酵母氨基乙硫酸氫鹽成纖維生長(zhǎng)因子

黑曲霉 4-嗎啉成纖維生長(zhǎng)因子10

阿穆爾斯克灣鹽地桿磷酸三聚成纖維生長(zhǎng)因子19

簇生離褶傘 4-氨基-2-羥基嘧啶-5-羧酸乙酯成纖維生長(zhǎng)因子21

蓋囊側(cè)耳 4-溴-5--2-氟甲苯成纖維生長(zhǎng)因子23

草類芽孢桿 2,6-二溴吡啶-4-羧酸程序性死亡分子-1

鍺栓孔亞鐵程序性死亡配體-1

平菇 3-甲基-2-(4-)丁酸穿孔蛋白1

群結(jié)腐霉 5-溴-1H--3-甲垂草扁桃酸

非食用色俾士麥棕對(duì)照液 (4-甲氧苯基)肼垂體中葉

毛柄(金針菇) 4--5-甲基-2氨基嘧啶雌二

釀酒酵母 4-溴-3-羥基苯甲雌

白耙齒 4-硝基-1,3-苯二硫酸鹽雌受體

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。