Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9557

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒	Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit	50次	FS-X9557

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。

細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性，對(duì)PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過(guò)性熒光染料碘化丙啶不能通過(guò)完整的活細(xì)胞，但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色，因此通常將Annexin V與PI配合染色，以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

操作步驟：

1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：

a．對(duì)于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。

b．對(duì)于懸浮細(xì)胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。

2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。

3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。

4、取 100μl的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。

5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜

Jurkat細(xì)胞用誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜

儲(chǔ)存條件：2～8℃，避光保存

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

蘭尼定受體3(RYR3)檢測(cè)試劑盒 forRyanodineReceptor3(RYR3)

甘丙肽(GAL)檢測(cè)試劑盒 forGalanin(GAL)

含亮氨suan豐富重復(fù)蛋白3C(LRRC3C)檢測(cè)試劑盒 forLeucineRichRepeatContainingProtein3C(LRRC3C)

胎兒腎鈣黏蛋白(KCAD)檢測(cè)試劑盒 forCadherin,FetalKidney(KCAD)

分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)檢測(cè)試劑盒 forSecretograninII(SCG2)

過(guò)氧化mei8(GPX8)檢測(cè)試劑盒 forGlutathionePeroxidase8(GPX8)

能受體β2(ADRβ2)檢測(cè)試劑盒 forAdrenergicReceptorBeta2(ADRb2)

CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄輔激活因子3(CRTC3)檢測(cè)試劑盒 forCREBRegulatedTranscriptionCoactivator3(CRTC3)

層粘連蛋白γ3(LAMγ3)檢測(cè)試劑盒 forLamininGamma3(LAMC3)

羥烷基輔meiA脫氫meiβ(HADHβ)檢測(cè)試劑盒 forHydroxyacylCoenzymeADehydrogenaseBeta(HADHb)

多巴anβ羥化mei(DβH)檢測(cè)試劑盒 forDopamineBetaHydroxylase(DbH)

GM2神經(jīng)節(jié)脂激活因子(GM2A)檢測(cè)試劑盒 forGM2GangliosideActivator(GM2A)

肌腱蛋白X(TNX)檢測(cè)試劑盒 forTenascinX(TNX)

封閉蛋白10(CLDN10)檢測(cè)試劑盒 forClaudin10(CLDN10)

suan性幾丁質(zhì)mei(CHIA)檢測(cè)試劑盒 forChitinase,Acidic(CHIA)

胸腺表達(dá)趨化因子(TECK)檢測(cè)試劑盒 forThymusExpressedChemokine(TECK)

基質(zhì)金屬蛋白mei1(MMP1)檢測(cè)試劑盒 forMatrixMetalloproteinase1(MMP1)
Alexa Fluor 488/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒勞拉相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Lorazepam Related Compound E

lv噻tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chlorthalidone

fu尼縮松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flunisolide

布他比妥標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Butalbital CIII

尼扎替定標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Nizatidine

維生suE醋suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：

曲silvan相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

溴化jia哌佐酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mepenzolate Bromide

拉西坦相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

碘海chun相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：