當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡與增殖>> Caspase 3熒光法檢測試劑盒(AFC)
貨號 | FS-X9571 |
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產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織caspase-3 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-3 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,活化的Caspase-3 由兩個大亞基和兩個小亞基組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,終導(dǎo)致細胞凋亡。Caspase-3 熒光檢測試劑盒就是將caspase-3 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當?shù)孜锉籆aspase-3 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,可通過熒光酶標儀測定其熒光強度(激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm)。 注意事項 1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-3 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-3 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數(shù)量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-3 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測定的RFU 值偏低,可以通過適當延長反應(yīng)的時間,如果值還是不高,可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
Caspase-3 Fluorescence Metric Assay | 20T|50T|100T | FS-X9571 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
半乳凝su6(GAL6)檢測試劑盒 forGalectin6(GAL6)
性神經(jīng)酰anmei2(ACER2)檢測試劑盒 forAlkalineCeramidase2(ACER2)
DNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子3(DDIT3)檢測試劑盒 forDNADamageInducibleTranscript3(DDIT3)
核糖核suanmeiA3(RNASE3)檢測試劑盒 forRibonucleaseA3(RNASE3)
組織金屬蛋白mei抑制因子4(TIMP4)檢測試劑盒 forTissueInhibitorsOfMetalloproteinase4(TIMP4)
多巴an受體D3(DRD3)檢測試劑盒 forDopamineReceptorD3(DRD3)
CD40配體(CD40L)檢測試劑盒 forClusterOfDifferentiation40Ligand(CD40L)
組蛋白H2A(H2A)檢測試劑盒 forHistoneH2A(H2A)
脂su1(LPIN1)檢測試劑盒 forLipin1(LPIN1)
拓撲異構(gòu)meiⅠ()檢測試劑盒 forTopoisomeraseI()
GasderminA蛋白(GSDMA)檢測試劑盒 forGasderminA(GSDMA)
生長分化因子2(GDF2)檢測試劑盒 forGrowthDifferentiationFactor2(GDF2)
窖蛋白(CAV1)檢測試劑盒 forCaveolin1(CAV1)
脫氧胞激mei(DCK)檢測試劑盒 forDeoxycytidineKinase(DCK)
跨膜蛋白1(TMEM1)檢測試劑盒 forTransmembraneProtein1(TMEM1)
Ⅳ型膠原α1(COL4α1)檢測試劑盒 forCollagenTypeIVAlpha1(COL4a1)
多聚免疫球蛋白受體(PIGR)檢測試劑盒 forPolymericImmunoglobulinReceptor(PIGR)
Caspase 3熒光法檢測試劑盒(AFC)依維junsu標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Ivermectin
莫地平相關(guān)物質(zhì)B標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
聚乙二chun15羥基硬脂suan標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Polyoxyl 15 Hydroxystearate
鹽suan標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Cimetidine Hydrochloride
鹽suan特拉zuo嗪標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Terazosin Hydrochloride
曲fu胸標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Trifluridine
別嘌chun相關(guān)物質(zhì)D標準品 規(guī)格:35mg 英文名稱:
N-乙酰-L-色氨suan標準品 規(guī)格:250mg 英文名稱:Tubocurarine Chloride
右旋安非他命相關(guān)物質(zhì)A標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱:
重酒石suan去jia腎上腺su標準品 規(guī)格:125mg 英文名稱:Norepinephrine Bitartrate
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