Caspase 2分光光度法檢測試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9572

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：Caspase 2分光光度法檢測試劑盒

英文名稱：Caspase-2 Colorimetric Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T

貨號：FS-X9572

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織caspase-2 檢測。Caspase 家族在介導細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-2（Nedd2/ICH-1）是遺傳毒性壓力（genotoxic stress）誘導的細胞凋亡信號途徑中的啟動酶，可能對于caspase-9 和caspase-3 激活和凋亡的下游事件誘導有重要的意義。caspase-2 的表達與組織的發(fā)育階段有關，均表達于心臟、腎和腦。Caspase-2 分光光度法檢測試劑盒是將caspase-2 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團，當該底物被caspase-2 剪切后，發(fā)色基團即游離出來，可通過酶標儀或分光光度計（λ=405nm 或400nm）測定其吸光值，可考察caspase-2 的活化程度。

注意事項

1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。

2. 對某些凋亡誘導劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-2 活化的機制，這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-2 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。

3. 細胞數(shù)量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg，以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求，因為Caspase-2 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關，如測定的OD 值偏低，可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

核糖核suanmeiK(RNASEK)檢測試劑盒 forRibonucleaseK(RNASEK)

jia狀旁腺激su相關蛋白(PTHrP)檢測試劑盒 forParathyroidHormoneRelatedProtein(PTHrP)

金屬硫蛋白1(MT1)檢測試劑盒 forMetallothionein1(MT1)

絲氨suan蛋白mei2(PRSS2)檢測試劑盒 forProtease,Serine2(PRSS2)

WNT1誘導信號通道蛋白1(WISP1)檢測試劑盒 forWNT1InducibleSignalingPathwayProtein1(WISP1)

NADH脫氫mei2(ND2)檢測試劑盒 forNADHDehydrogenase2(ND2)

神經(jīng)肽Y受體Y5(NPY5R)檢測試劑盒 forNeuropeptideYReceptorY5(NPY5R)

棕櫚?；さ鞍?/span>6(MPP6)檢測試劑盒 forMembraneProtein,Palmitoylated6(MPP6)

血紅蛋白α1(HBα1)檢測試劑盒 forHemoglobinAlpha1(HBa1)

絲氨suan蛋白mei50(PRSS50)檢測試劑盒 forProtease,Serine50(PRSS50)

10kDa熱休克蛋白1(HSP10)檢測試劑盒 forHeatShock10kDaProtein1(HSP10)

CCAAT增強子結(jié)合蛋白β(CEBPβ)檢測試劑盒 forCCAAT/EnhancerBindingProteinBeta(CEBPb)

癌調(diào)蛋白2(OCM2)檢測試劑盒 forOncomodulin2(OCM2)

S100鈣結(jié)合蛋白A5(S100A5)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinA5(S100A5)

纖維介su蛋白(FGL2)檢測試劑盒 forFibrinogenLikeProtein2(FGL2)

肝配蛋白A受體1(EPHA1)檢測試劑盒 forEphrinTypeAReceptor1(EPHA1)

白血病抑制因子受體(LIFR)檢測試劑盒 forLeukemiaInhibitoryFactorReceptor(LIFR)
Caspase 2分光光度法檢測試劑盒水楊suan標準品規(guī)格:125mg 英文名稱：Salicylic Acid

水楊suan片標準品規(guī)格:30tables 英文名稱：

替坦標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Cefotetan

甘露chun標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mannitol

地丹諾辛標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Didanosine

替硝zuo相關物質(zhì)A標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：

青霉su鈉標準品規(guī)格:150mg 英文名稱：Penicillin G Sodium

氨芐青霉su標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Ampicillin

氨芐青霉su鈉標準品規(guī)格:125mg 英文名稱：Ampicillin Sodium

環(huán)jia硅油 4標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cyclomethicone 4
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)