Caspase 2熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9573

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
Caspase 2熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)	Caspase-2 Fluorescence Metric Assay	20T\|50T\|100T	FS-X9573

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織Caspase-2 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中Caspase-2 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子，與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-2 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段，它被激活，活化的Caspase-2 由兩個(gè)大亞基和兩個(gè)小亞基組成，裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物，終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。Caspase-2 熒光檢測(cè)試劑盒就是將Caspase-2 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán)。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-2 剪切后，發(fā)色基團(tuán)即游離出來，可通過熒光酶標(biāo)儀測(cè)定其熒光強(qiáng)度（激發(fā)波長(zhǎng)=485nm,發(fā)射波長(zhǎng)=535nm）。

注意事項(xiàng)

1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。

2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-2 活化的機(jī)制，這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-2 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。

3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg，以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求，因?yàn)镃aspase-2 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān)，如測(cè)定的RFU 值偏低，可以通過適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)的時(shí)間，如果值還是不高，可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

頭蛋白(NOG)檢測(cè)試劑盒 forNoggin(NOG)

肌紅蛋白(MYO)檢測(cè)試劑盒 forMyoglobin(MYO)

肥胖抑制su(OB)檢測(cè)試劑盒 forObestatin(OB)

62kDa核孔蛋白(NUP62)檢測(cè)試劑盒 forNucleoporin62kDa(NUP62)

皮質(zhì)su3(CTXN3)檢測(cè)試劑盒 forCortexin3(CTXN3)

花生四烯suan-5-脂加氧mei(ALOX5)檢測(cè)試劑盒 forArachidonate-5-Lipoxygenase(ALOX5)

溶血卵磷?；D(zhuǎn)移mei3(LPCAT3)檢測(cè)試劑盒 forLysophosphatidylcholineAcyltransferase3(LPCAT3)

基質(zhì)金屬蛋白mei9(MMP9)檢測(cè)試劑盒 forMatrixMetalloproteinase9(MMP9)

脂酰轉(zhuǎn)移mei(LCAT)檢測(cè)試劑盒 forLecithinCholesterolAcyltransferase(LCAT)

唾液suan轉(zhuǎn)移mei7B(SIAT7B)檢測(cè)試劑盒 forSialyltransferase7B(SIAT7B)

suan羧化mei(PC)檢測(cè)試劑盒 forPyruvateCarboxylase(PC)

shi神經(jīng)變誘導(dǎo)反應(yīng)蛋白(OPTN)檢測(cè)試劑盒 forOptineurin(OPTN)

葡萄糖磷suan變位mei2樣蛋白1(PGM2L1)檢測(cè)試劑盒 forPhosphoglucomutase2LikeProtein1(PGM2L1)

外切mei體成分3(EXOSC3)檢測(cè)試劑盒 forExosomeComponent3(EXOSC3)

催產(chǎn)su(OT)檢測(cè)試劑盒 forOxytocin(OT)

促卵泡su(FSH)檢測(cè)試劑盒 forFollicleStimulatingHormone(FSH)

胰島su樣生長(zhǎng)因子2(IGF2)檢測(cè)試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactor2(IGF2)
Caspase 2熒光法檢測(cè)試劑盒(AFC)環(huán)jia硅油 5標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cyclomethicone 5

環(huán)jia硅油 6標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cyclomethicone 6

A相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

蘋果suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Malic Acid

二乙酰甘油一suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Diacetylated Monoglycerides

單甘酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Monoglycerides

地丹諾辛相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

吡羅克tong乙chunan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Piroctone Olamine

阿si咪zuo標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Astemizole