p53抑制劑(PFT-α)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9651

英文名稱：Pifithrin-α

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

貨號(hào)：FS-X9651

產(chǎn)品介紹:

Pifithrin-α (PFT--α) 是一種常用的p53抑制劑，可逆性抑制p53依賴性的基因轉(zhuǎn)錄活性如細(xì)胞周期蛋白 G、p21/waf1/cipl 和 mdm2蛋白的表達(dá)。Pifithrin-α不僅抑制p53介導(dǎo)的由細(xì)胞毒素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，還能抑制DNA損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。Pifithrin-α作用于海馬細(xì)胞，并降低p53-DNA結(jié)合活性水平、抑制caspase活化。Pifithrin-α誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻斷，并顯著降低DNA合成。另外，與化療或放射性共同處理癌癥時(shí)，Pifithrin-α?xí)p輕化療或放射性對(duì)正常組織的副作用。

靶點(diǎn)：p53

外觀：淺白色粉末

純度：≥95%

溶解性：溶于DMSO

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期24個(gè)月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

防御suα3(DEFα3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DEFα3 ELISA Kit，DEFα3，

法尼基轉(zhuǎn)移meiα(FNTα)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FNTα ELISA Kit，F(xiàn)NTα，

腭/肺/鼻上皮癌關(guān)聯(lián)蛋白(PLUNC)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PLUNC ELISA Kit，PLUNC，

短蛋白聚糖(BCAN)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：BCAN ELISA Kit，BCAN，

人抗脫氧核糖核suanmeiB(Anti-DNaseB)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Anti-DNaseB ELISA Kit，Anti-DNaseB，

緊密連接蛋白1(TJP1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TJP1 ELISA Kit，TJP1，

卷曲同源物6(FZD6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FZD6 ELISA Kit，F(xiàn)ZD6，

角化不良蛋白(DKC)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DKC ELISA Kit，DKC，

剪接因子4(SF4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SF4 ELISA Kit，SF4，

脊柱后側(cè)凸肽mei(KY)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：KY ELISA Kit，KY，

基質(zhì)抗原2(STAG2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：STAG2 ELISA Kit，STAG2，

肌糖α(SGCα)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SGCα ELISA Kit，SGCα，

肌球蛋白ⅠC(MYO1C)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MYO1C ELISA Kit，MYO1C，

黃體激su(LH)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LH ELISA Kit，LH，

黑su瘤缺乏因子1(AIM1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：AIM1 ELISA Kit，AIM1，

三葉因子3(TFF3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：TFF3 ELISA Kit，TFF3，

趨化因子C-X-C-基元受體5(CXCR5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CXCR5 ELISA Kit，CXCR5，
p53抑制劑(PFT-α)多沙zuo嗪相關(guān)雜質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：Doxazosin Related Compound B

fu相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Flurazepam Related Compound F

咪zuo標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Imidazole

na韋拉平相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：

卡西平標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Oxcarbazepine

西諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cinoxacin

七fu烷標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1ml 英文名稱：Sevoflurane

勞拉相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Lorazepam Related Compound A

美他尼標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Bumetanide

美他尼相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：