細(xì)胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9618

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：細(xì)胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9618

產(chǎn)品介紹:

有絲分裂，又稱為間接分裂，由W. Fleming (1882)年發(fā)現(xiàn)于動(dòng)物及E. Strasburger 發(fā)現(xiàn)于植物。特點(diǎn)是有紡錘體染色體出現(xiàn)，子染色體被平均分配到子細(xì)胞，這種分裂方式普遍見于高等動(dòng)植物（動(dòng)物和高等植物）。有絲分裂是真核細(xì)胞分裂產(chǎn)生體細(xì)胞的過程。

有絲分裂指數(shù)是用來表示細(xì)胞倍增速度的指數(shù)。它可以反映在給定時(shí)刻進(jìn)入有絲分裂的細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例（%）。

組蛋白是真核生物中呈強(qiáng)堿性的蛋白。組蛋白可以被乙?；?、磷酸化、甲基化和泛素化修飾。這些修飾會(huì)改變?nèi)旧|(zhì)的空間結(jié)構(gòu)，從而在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、染色體裝配等過程中起重要作用。Histone H3 的Ser10，Ser28 和Thr11 都會(huì)發(fā)生磷酸化修飾。Histone H3 的這些磷酸化和有絲分裂或減數(shù)分裂過程中的染色質(zhì)濃縮密切相關(guān)。

我司有絲分裂指數(shù)試劑盒通過熒光標(biāo)記磷酸化Ser28 位點(diǎn)的H3 組蛋白，標(biāo)記進(jìn)入有絲分裂M 期的細(xì)胞，搭配核酸熒光染料，從而計(jì)算這些陽性細(xì)胞在總細(xì)胞數(shù)中的占比。本試劑盒適用于熒光顯微鏡和高內(nèi)涵分析。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

RalA結(jié)合蛋白1(RALBP1)檢測試劑盒 forRalABindingProtein1(RALBP1)

著絲粒蛋白32(CENP32)檢測試劑盒 forCentromereProtein32(CENP32)

淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)檢測試劑盒 forLymphotactin(Lptn)

干擾suα5(IFNα5)檢測試劑盒 forInterferonAlpha5(IFNa5)

激肽釋放mei5(KLK5)檢測試劑盒 forKallikrein5(KLK5)

硬骨su(SOST)檢測試劑盒 forSclerostin(SOST)

腺A2b受體(ADORA2b)檢測試劑盒 forAdenosineA2bReceptor(ADORA2b)

羧肽meiD(CPD)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseD(CPD)

囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)檢測試劑盒 forCysticFibrosisTransmembraneConductanceRegulator(CFTR)

神經(jīng)源su3(NEUROG3)檢測試劑盒 forNeurogenin3(NEUROG3)

神經(jīng)連接蛋白2(NLGN2)檢測試劑盒 forNeuroligin2(NLGN2)

M2-型suan激mei(PKM2)檢測試劑盒 forPyruvateKinase,Muscle(PKM2)

白介su8(IL8)檢測試劑盒 forInterleukin8(IL8)

白介su10(IL10)檢測試劑盒 forInterleukin10(IL10)

肌微管su相關(guān)蛋白9(MTMR9)檢測試劑盒 forMyotubularinRelatedProtein9(MTMR9)

二jia基精氨suan二水解mei2(DDAH2)檢測試劑盒 forDimethylarginineDimethylaminohydrolase2(DDAH2)

N-jia基-D-天氡氨suan離子能谷氨suan受體2B(GRIN2B)檢測試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,N-Methyl-D-Aspartate2B(GRIN2B)
細(xì)胞有絲分裂指數(shù)分析試劑盒lv琥珀酰單標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:150mg 英文名稱：Succinylmonocholine Chloride

染料木標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:30mg 英文名稱：Genistin

fu哌啶chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Haloperidol

lv化花青su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Cyanidin Chloride

紅霉suB標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Erythromycin B

利na孕chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：Lynestrenol

lv噻tong相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

醋suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Gonadorelin Acetate

標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Trichlorfon

青霉an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Penicillamine
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)