XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9711

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱：

產品規(guī)格：250T|500T|1000T

貨號：FS-X9711

產品介紹:

XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒是應用二甲氧唑黃2,3-bis[2-methoxy

-4-nitro-5-sμlfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide快速高靈敏度檢測細胞增殖和細胞毒性的比色檢測產品。

XTT在電子耦合試劑存在的情況下能夠被線粒體內的一些與輔酶Ⅱ相關的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的Formazan，生成的Formazan量與活細胞數量成正比。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數量呈線性關系。

本XTT試劑為配制好的即用型試劑，直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分，XTT試劑很穩(wěn)定，對細胞沒有毒性，可以長時間孵育細胞。XTT 法測定細胞增殖或毒性試驗中活細胞數目的靈敏度高，無放射性，檢測細胞增殖實驗的靈敏度比其它方法如MTT高。

儲存條件：2-8℃避光保存。長期存放-20℃避光保存。

注意：

1．XTT試劑短期存放于2-8℃，長期存放請分裝后-20℃避光保存。

2．避免反復凍融。

3．凍存后溶解時注意重新混勻。

有效期：一年。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

紅細胞生成受體(EPOR)英文名：EPOR 自噬相關蛋白1抗體包裝10MG

紅細胞生成(EPO)英文名：EPO β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16 抗體包裝1g

橫紋肌輔肌動蛋白α(sm Actinin-α)英文名：sm Actinin-α 腺瘤肉調節(jié)蛋白抗體包裝25g

黑色細胞抗體(MC Ab)英文名：MC Ab 銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體包裝5g

黑色瘤(Melanoma)英文名：Melanoma 通道蛋白-7抗體包裝1g

核轉錄因子kBP65(NFkBP65)英文名：NFkBP65 谷基轉移1抗體包裝5g

核轉錄因子1(AP－1)英文名：AP－1 p21活化蛋白激ARHG7抗體包裝200mg

核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)英文名：NF-κB p65 磷化肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體包裝5g

核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)英文名：NF-κB p65 2-基乙硫雙加氧抗體包裝100g

核因子κB受體活化因子配基(RANKL)英文名：RANKL 血管緊張Ⅱ-1型受體抗體包裝25g

核因子κB受體活化劑配體(RANKL)英文名：RANKL 腺苷A2b受體/神經生長因子1受體抗體包裝5g

核因子κB(NF-κB)英文名：NF-κB 去整合樣金屬蛋白19抗體包裝100g

核因子κB(NF-Kb)英文名：NF-Kb 原癌基因AF4蛋白抗體包裝25g

核因子E2相關因子2(Nrf2)英文名：Nrf2 整合樣金屬蛋白與凝血樣1蛋白抗體包裝500g

含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)英文名：Tie-2 整合樣金屬蛋白與凝血樣2蛋白抗體包裝10g

共濟失調蛋白7樣1抗體白介34(IL34)Ledipasvir 是一種有效的 HCV NS5A 抑制劑，能夠抑制 GT1a 和 GT1b 復制子，EC50 值分別為 34
XTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒大腸埃希氏 2-巰基乙氧基乙干擾誘導T趨化因子

無殼異擔子 2,4-二-5-干擾誘導蛋白10

黑曲霉 3-氨基-5,6-二甲基-1,2,4-三干擾誘導蛋白10

黃桿屬 2-氨基-5,6-二氫-4H-苯并噻唑-7-酮干擾誘導蛋白4

豌豆根瘤 4-基-2-氟甲酯干因子

河生腸桿生物Ⅰ型 2-氨基-6-甲砜基苯并噻唑干因子受體

美澳型核果褐腐病 2-氨基嘧啶-5-高爾基體蛋白73

白乳菇 3-吡唑啉酮鹽酸鹽高密度脂蛋白

大腸埃希 5-氟-2-甲酸甲酯高密度脂蛋白膽固

固氮 2-甲氧基-5-三氟高遷移率族蛋白B1

葡萄座腔 3-氨基-4-（三氟甲基）吡啶高鐵血紅蛋白

檸檬黃色紅色桿 7-溴-6--4(3H)-喹唑啉酮睪酮

中國臺灣根霉 3-(2-氟苯基)弓形蟲IgG抗體

煙色擬盤多毛孢 2,3-喹啉二甲酸二甲酯弓形蟲IgM抗體

假單胞屬 3-氨基-4-甲氧基苯甲酰鉤端螺旋體IgG抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)