當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡與增殖>> 噻唑藍MTT
貨號 | FS-X9675 |
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產(chǎn)品介紹:
本品常用于生化研究中酶活力的測定,也可用于細胞增殖檢測。 號:298-93-1 分子式:C18H16N5SBr 分子量:414.3 純度:≥98% 性狀:黃色粉末 溶解性:溶于甲醇和DMSO,微溶于水 儲存條件:2~8℃避光 |
中文名稱:噻唑藍MTT
英文名稱:Thiazolyl blue tetrazolium bromid
產(chǎn)品規(guī)格:250mg|1g
貨號:FS-X9675
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
乙型肝炎e抗原(HBeAg)英文名:HBeAg ADCK1蛋白抗體包裝25g
乙型肝炎e抗體(HBeAb)英文名:HBeAb ?;Y(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝5g
乙酰(acetyl-CoA)英文名:acetyl-CoA α/β解4抗體包裝1g
乙酰轉(zhuǎn)移(CHAT)英文名:CHAT ADCK2蛋白抗體包裝250mg
乙酰酯(AchE)英文名:AchE 乙脫氫16家庭A1抗體包裝1g
乙酰受體抗體(AChRab)英文名:AChRab 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g
乙酰(ACH)英文名:ACH 乙脫氫1抗體包裝250mg
胰脂肪(PL)英文名:PL δ基乙酰脫抗體包裝1g
胰激肽原(PK)英文名:PK 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體包裝500mg
胰高血糖樣肽2(GLP-2)英文名:GLP-2 α2巨球蛋白(α-2M)抗體包裝250mg
胰高血糖樣肽1(GLP-1)英文名:GLP-1 ACCSL蛋白抗體包裝500mg
胰高血糖(GC)英文名:GC 胎蛋白抗體包裝100mg
胰淀(Amylin)英文名:Amylin β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體包裝25g
胰島細胞抗體(ICA)英文名:ICA 星形肌動蛋白抗體包裝1g
胰島自身抗體(IAA)英文名:IAA 系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體包裝5g
激活受體2A抗體胱天蛋白14(P14)Selumetinib (AZD6244) is a potent, highly selective MEK1 inhibitor with IC50 of
噻唑藍MTT茶樹菇 歐前胡B類清道夫受體1
圍小叢殼 白樺脂酸B-趨化因子1
乳桿屬 白樺脂B活化因子
假單胞屬 酪B瘤-XL
栗疫 諾米林B瘤因子2
釀酒酵母 延胡索乙B瘤因子6
東方伊薩酵母 羅定C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1
海蘇特氏 蘆竹堿Ca-ATP
節(jié)桿屬 番茄紅cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白
葡萄座腔 順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯CC趨化因子受體1
枯草芽孢桿 他坦CC趨化因子受體2
鰻利斯頓氏 蘆薈大黃CC趨化因子受體5
尖鐮孢(尖孢鐮刀 )(可定) 平CD100分子
粒狀青霉 莨菪堿CD133分子
三孢布拉霉 氧化苦堿CD146分子
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