噻唑藍(lán)MTT-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9675

產(chǎn)品介紹:

本品常用于生化研究中酶活力的測(cè)定，也可用于細(xì)胞增殖檢測(cè)。

號(hào)：298-93-1

分子式：C18H16N5SBr

分子量：414.3

純度：≥98%

性狀：黃色粉末

溶解性：溶于甲醇和DMSO，微溶于水

儲(chǔ)存條件：2～8℃避光

中文名稱：噻唑藍(lán)MTT

英文名稱：Thiazolyl blue tetrazolium bromid

產(chǎn)品規(guī)格：250mg|1g

貨號(hào)：FS-X9675

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

乙型肝炎e抗原(HBeAg)英文名：HBeAg ADCK1蛋白抗體包裝25g

乙型肝炎e抗體(HBeAb)英文名：HBeAb ?；Y(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體包裝5g

乙酰(acetyl-CoA)英文名：acetyl-CoA α/β解4抗體包裝1g

乙酰轉(zhuǎn)移(CHAT)英文名：CHAT ADCK2蛋白抗體包裝250mg

乙酰酯(AchE)英文名：AchE 乙脫氫16家庭A1抗體包裝1g

乙酰受體抗體(AChRab)英文名：AChRab 粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g

乙酰(ACH)英文名：ACH 乙脫氫1抗體包裝250mg

胰脂肪(PL)英文名：PL δ基乙酰脫抗體包裝1g

胰激肽原(PK)英文名：PK 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白4抗體包裝500mg

胰高血糖樣肽2(GLP-2)英文名：GLP-2 α2巨球蛋白(α-2M)抗體包裝250mg

胰高血糖樣肽1(GLP-1)英文名：GLP-1 ACCSL蛋白抗體包裝500mg

胰高血糖(GC)英文名：GC 胎蛋白抗體包裝100mg

胰淀(Amylin)英文名：Amylin β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白3抗體包裝25g

胰島細(xì)胞抗體(ICA)英文名：ICA 星形肌動(dòng)蛋白抗體包裝1g

胰島自身抗體(IAA)英文名：IAA 系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)蛋白TREX1抗體包裝5g

激活受體2A抗體胱天蛋白14(P14)Selumetinib (AZD6244) is a potent, highly selective MEK1 inhibitor with IC50 of
噻唑藍(lán)MTT茶樹(shù)菇歐前胡B類清道夫受體1

圍小叢殼白樺脂酸B-趨化因子1

乳桿屬白樺脂B活化因子

假單胞屬酪B瘤-XL

栗疫諾米林B瘤因子2

釀酒酵母延胡索乙B瘤因子6

東方伊薩酵母羅定C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1

海蘇特氏蘆竹堿Ca-ATP

節(jié)桿屬番茄紅cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白

葡萄座腔順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯CC趨化因子受體1

枯草芽孢桿他坦CC趨化因子受體2

鰻利斯頓氏蘆薈大黃CC趨化因子受體5

尖鐮孢（尖孢鐮刀）（可定）平CD100分子

粒狀青霉莨菪堿CD133分子

三孢布拉霉氧化苦堿CD146分子

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