細(xì)胞核提取試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9677

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：細(xì)胞核提取試劑盒

英文名稱：Nuclear Extraction Kit

產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

貨號(hào)：FS-X9677

產(chǎn)品介紹:

細(xì)胞核提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的細(xì)胞核。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞核的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶，性能穩(wěn)定。

操作步驟：

1. 樣本處理

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL預(yù)冷的Lysis Buffer，再加入50μL Reagent A，0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開(kāi)的組織，可用雙層紗布過(guò)濾。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800 g 離心5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5 ×107個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，再加入50μL Reagent A，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨細(xì)胞20~30次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中，4℃，700g 離心5 min。細(xì)胞核沉淀在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸沉淀。

3. 取另一新離心管內(nèi)加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中，置于Medium Buffer之上，4℃，700 g 離心5min。細(xì)胞核沉淀在管底。

4. 棄上清，在細(xì)胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細(xì)胞核沉淀，1000g 離心10min ，棄上清，得到較純的細(xì)胞核沉淀。

5. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸細(xì)胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。

儲(chǔ)存條件：4℃

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

一氧化碳血紅蛋白(HbCO)英文名：HbCO 血管緊張Ⅱ受體相關(guān)蛋白抗體包裝5g

一氧化氮合成(NOS)英文名：NOS 膜粘連蛋白2受體抗體包裝1g

一氧化氮(NO)英文名：NO 血管緊張1轉(zhuǎn)換抑制劑抗體包裝250mg

葉受體(FOLR)英文名：FOLR 拮抗凋亡轉(zhuǎn)錄因子抗體包裝100g

葉(FA)英文名：FA α-1抗胰糜蛋白抗體包裝25g

鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)英文名：KLH α-1抗抗體包裝1g

氧化型(GSSG)英文名：GSSG ATP結(jié)合蛋白家族6抗體包裝5g

氧化型(GSGS)英文名：GSGS 三磷腺苷結(jié)合盒亞家族G1抗體包裝1g

氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)英文名：OxLDL 脂聯(lián)受體2抗體包裝5g

氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)英文名：Ox-HDL ANGEL1蛋白抗體包裝100g

氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)英文名：OLAb ANGEL2蛋白抗體包裝25g

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)英文名：OxLDL ANKLE2蛋白抗體包裝500g

酰胺腺嘌呤二核苷磷(NADPH)英文名：NADPH 特異性錨樣蛋白1抗體包裝25g

酰胺腺嘌呤二核苷(NADH)英文名：NADH 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白13B抗體包裝5g

牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(DMP1)英文名：DMP1 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體包裝25g

芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體白介2(IL2)Palomid 529 是一種有效的 mTORC1 和 mTORC2 復(fù)合體抑制劑。
細(xì)胞核提取試劑盒嗜熱脂肪地芽孢桿阿魏酸c-Jun氨基末端激

約氏不動(dòng)桿預(yù)染低分子量蛋白MARKERClara分泌蛋白

黑曲霉曲C-Raf原癌基因絲蘇氨蛋白激

釀酒酵母 D-交酯CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄輔激活因子1

日內(nèi)瓦毛霉丹酰尸CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄輔激活因子2

云南楊黃檳榔堿CX3C趨化因子;fractalkine

麥芽糖假絲酵母酸CXC趨化因子配體16

平菇疊氮環(huán)糊精CXC趨化因子受體1

黃青霉花生四烯酸CXC趨化因子受體2

殺鮭氣單胞虎杖苷CXC趨化因子受體4

變幻青霉 L-鵝肌肽C端聚集蛋白

腐皮殼厚樸酚C-反應(yīng)蛋白

淺金鏈霉替拉扎明C肽

血紅紅曲霉 Citronella oilDcR3;TNFRSF6B

黑曲霉蒿甲Dectin-1蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)