線粒體提取試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9678

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T

貨號(hào)：FS-X9678

產(chǎn)品介紹:

線粒體提取試劑盒用于從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動(dòng)物軟組織(肝或腦組織)和硬組織(肌肉)以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

操作步驟：

1. 樣本處理：

a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次;

b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800g離心5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要5×107個(gè)細(xì)胞，加入1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次。

2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000g 離心5 min。

3. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃，1000g再次離心5 min。

4. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。

5. 往線粒體沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心5 min。

6. 取上清，轉(zhuǎn)移至新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底。

7. 用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

儲(chǔ)存條件：-20℃

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)英文名：CIC 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體包裝500g

血小板因子4(PF-4/CXCL4)英文名：PF-4/CXCL4 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體包裝1g

血小板因子3(PF-3)英文名：PF-3 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體包裝1g

血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)英文名：PDGFsR-α 氫離子轉(zhuǎn)運(yùn)ATP合成6G抗體包裝5g

血小板衍生生長(zhǎng)因子CC(PDGF-CC)英文名：PDGF-CC 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝5ml

血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)英文名：PDGF-BB 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體包裝100mg

血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)英文名：PDGF-AB 型肝炎病核結(jié)合蛋白-1抗體包裝1g

血小板衍生生長(zhǎng)因子AA(PDGF-AA)英文名：PDGF-AA 芳香基硫酯K抗體包裝100MG

血小板生長(zhǎng)因子(PDGF)英文名：PDGF 神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體包裝50MG

血小板生成(TPO)英文名：TPO 錨定蛋白G抗體包裝25g

血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)英文名：GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61 肌動(dòng)蛋白α/α-SMA/α Actin抗體包裝5g

血小板活化因子(PAF)英文名：PAF 整合樣金屬蛋白與凝血1型抗體包裝1g

血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)英文名：TSP-1 整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體 (N端抗體)包裝250mg

血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)英文名：FDP 整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗體包裝5g

血纖蛋白原γ鏈(FGG)英文名：FGG 內(nèi)收蛋白抗體包裝250mg

磷化芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移抗體白介2(IL2)XL413 hydrochloride 是一種有效的，選擇性的，ATP 競(jìng)爭(zhēng)性的 Cdc7 抑制劑，IC50 值為 3.4 nM，同時(shí)對(duì) CK2 和 PIM1
線粒體提取試劑盒枝狀枝孢根皮Delta-like ligand 1

中國(guó)節(jié)叢孢鄰甲氧基肉桂Delta-like ligand4

麥?zhǔn)辖惶鎲伟?/span> N-Cbz-L-組酸Dickkopf 1

嗜管歐文氏 4-溴-3-甲酸甲酯DLEC1

豬丹絲 2-甲氧基-5-氟尿啶DNA甲基轉(zhuǎn)移1

棒曲霉 4-氟-2-DNA修復(fù)基因XRCC1

變平滑假絲酵母二芐基二硫代氨酸鋅D二聚體

黑木耳8808 2,6-二硫酸鹽D-乳酸

空腸彎曲桿 4-乙酰氨-2,2,6,6-四甲基-1-氧D-乳酸鹽

釀酒酵母 4-氨基-2,2,6,6-四甲基氧自由基D-天冬氨酸

高粱生平臍蠕孢 5-溴戊酸乙酯D-天冬氨酸氧化

糞腸球 5-溴-2-氟EB病衣殼抗原IgA

彩色豆馬勃反式-1,2-環(huán)己二Endoglin

黑曲霉叔戊鈉ENOSF1基因

大腸埃希氏 3,5-二氨基-6-吡-2-羧酸甲酯膜外核苷酸焦磷酸；磷酸二酯家族成員2

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