線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9679

產(chǎn)品介紹:

線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10 )是一種以JC-10 為熒光探針，快速靈敏地檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位變化的試劑盒，可以用于早期的細(xì)胞凋亡檢測。

JC-10 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△Ψm 的理想熒光探針?？梢詸z測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時(shí)，JC-10 聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時(shí)，JC-10 不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時(shí) JC-10 為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對(duì)比例來衡量線粒體去極化的比例。

線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。通過 JC-10 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細(xì)胞膜電位的下降，同時(shí)也可以用JC-10 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)檢測指標(biāo)。

JC-10 單體的大激發(fā)波長為 515nm ，大發(fā)射波長為529nm;JC-10 聚合物的大激發(fā)波長為585nm ，大發(fā)射波長為590nm 。實(shí)際觀察時(shí)，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

本試劑盒提供了CCCP 作為誘導(dǎo)線粒體膜電位下降的陽性對(duì)照。對(duì)于六孔板中的樣品，本試劑盒共可以檢測 100 個(gè)樣品;對(duì)于 12 孔中的樣品，本試劑盒共可以檢測200 個(gè)樣品。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，避免反復(fù)凍融，有效期一年。

中文名稱：線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10)

英文名稱：Mitochondrial Membrane Potential Kit(JC-10 Assay)

產(chǎn)品規(guī)格：100T

貨號(hào)：FS-X9679

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

血纖蛋白原(Fbg)英文名：Fbg 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體包裝100g

血纖蛋白(fibrin)英文名：fibrin 脂聯(lián)受體1抗體包裝25g

血栓B2(TXB2)英文名：TXB2 腎上腺髓質(zhì)受體抗體包裝500g

血栓A2(TXA2)英文名：TXA2 脂聯(lián)抗體包裝1g

血栓前體蛋白(TpP)英文名：TpP 腎上腺髓質(zhì)抗體包裝1g

血清總補(bǔ)體(CH50)英文名：CH50 腺苷受體A3抗體包裝5g

血清/血清胺(ST)英文名：ST ADRA2腎上腺能受體2抗體包裝1g

血清淀粉樣蛋白A3(SAA3)英文名：SAA3 腎上腺能受體β1抗體包裝5g

血清淀粉樣蛋白A(SAA)英文名：SAA 腎上腺能受體β2/β2-AR抗體包裝1g

血漿激肽釋放(KLKB1)英文名：KLKB1 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體包裝25g

血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)英文名：GMP-140 軟骨蛋白聚糖抗體包裝5g

血紅氧合2(HO-2)英文名：HO-2 5-基乙酰合1抗體包裝100g

血紅氧合1(HO-1)英文名：HO-1 p53凋亡激蛋白1抗體包裝500g

血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子(vWF)英文名：vWF P53凋亡激蛋白2抗體包裝250mg

血管舒緩激肽(BK)英文名：BK 激活受體2B抗體包裝1g

肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體白介2(IL2)Orteronel(TAK-700) was selected as a candidate for clinical evaluation. orterone
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10)白色鏈孢囊 [(1R)-(內(nèi)型,反式)]-(+)-3-溴樟腦-8-磺酸銨鹽EVA1;MPZL2

大腸埃希氏桿 4-水楊酸-5-磺酰E鈣粘著蛋白;上皮性鈣黏附蛋白

核盤（正確） 2-溴-3-丁基噻吩E選擇

假腸膜明串珠 2-乙氧基吡啶FK506結(jié)合蛋白52

瓶孢青霉 5--2-羥基苯乙酮FMS樣激3

勞地毛霉 BOC-L-焦乙酯G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1

釀酒酵母 3--2-氟溴苯G蛋白偶聯(lián)受體32

糙孢藍(lán)狀六氫鄰苯二甲酰亞類缺陷病1型p24抗原

粉紅粘帚霉 1-三苯基膦-2-酮HLA II類組織相容性抗原DQalpha1

巨大芽胞桿順式-1,2-環(huán)己二HLA-DPA1

杰丁塞伯林德納氏酵母 1,4-二溴-2-氟苯HLA-DPB1

淡黃濕傘 2,4-二氟苯HLA-DR4抗原

Streptomyces setonensis Shomura (R)-(-)-甘油縮酮H-ras

單核增生李斯特氏 3,4,5-三氟苯酸IFN-γR1-CDw119

黑曲霉代肟基乙酸乙酯II型膠原蛋白

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