Caspase 6分光光度法檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9576

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-6 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中起著非常重要的作用。Caspase-6 是級聯(lián)酶的下游分子，被Caspase-9 激活后，激活下游Larmin A 的活性，導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)發(fā)生皺縮及細(xì)胞膜滲漏。Caspase-6 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中，沒有活性；但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段時(shí)則被激活。Caspase-6 分光光度法檢測試劑盒就是將caspase-6 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán)，當(dāng)該底物被caspase-6 剪切后，發(fā)色基團(tuán)即游離出來，可通過酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)（λ=405nm 或400nm）測定其吸光值，可考察caspase-6 的活化程度。

注意事項(xiàng)

1. Caspase-6 Substrate 避光保存及使用。

2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-6 活化的機(jī)制，這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測Caspase-6 活性無明顯改變，需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號通路。

3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50~100mg，以便能達(dá)到測定需要的100~200μg 蛋白的要求，因?yàn)镃aspase-6 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān)，如測定的OD 值偏低，可通過增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。

中文名稱：Caspase 6分光光度法檢測試劑盒

英文名稱：Caspase-6 Colorimetric Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T|50T|100T

貨號：FS-X9576

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

銜接因子相關(guān)蛋白復(fù)合體2μ1(AP2μ1)檢測試劑盒 forAdaptorRelatedProteinComplex2Mu1(AP2m1)

腫瘤壞死因子配體超家族成員13(TNFSF13)檢測試劑盒 forTumorNecrosisFactorLigandSuperfamily,Member13(TNFSF13)

轉(zhuǎn)化生長因子β誘導(dǎo)蛋白(TGFβI)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBetaInducedProtein(TGFbI)

封閉蛋白11(CLDN11)檢測試劑盒 forClaudin11(CLDN11)

生長調(diào)節(jié)致癌基因γ(GROγ)檢測試劑盒 forGrowthRegulatedOncogeneGamma(GROg)

胸腺生成su(TMPO)檢測試劑盒 forThymopoietin(TMPO)

內(nèi)臟脂肪特異性絲氨suan蛋白mei抑制因子(Vaspin)檢測試劑盒 forVisceralAdiposeTissueDerivedSerineProteaseInhibitor(Vaspin)

90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)檢測試劑盒 forHeatShockProtein90kDaBeta1(HSP90b1)

激肽原1(KNG1)檢測試劑盒 forKininogen1(KNG1)

羧肽meiX2(CPX2)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseX2(CPX2)

粘蛋白6(MUC6)檢測試劑盒 forMucin6(MUC6)

基質(zhì)金屬蛋白mei2(MMP2)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase2(MMP2)

核糖體結(jié)合糖蛋白Ⅰ(RPN1)檢測試劑盒 forRibophorinI(RPN1)

跨膜絲氨suan蛋白mei6(TMPRSS6)檢測試劑盒 forTransmembraneProtease,Serine6(TMPRSS6)

胎球蛋白B(FETUB)檢測試劑盒 forFetuinB(FETUB)

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBeta2(TGFb2)

YY肽(PYY)檢測試劑盒 forPeptideYY(PYY)
Caspase 6分光光度法檢測試劑盒雙醋suan酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:350mg 英文名稱：Triamcinolone Diacetate

維拉帕mi相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

醋suan膚輕松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Fluocinolone Acetonide

jia磺酰jia烷標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methylsulfonylmethane

二jia基亞砜標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:3g 英文名稱：Dimethyl Sulfoxide

丙tong 規(guī)格:1.5ml×3ampules 英文名稱：Acetone

2-丙chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：2-Propanol

jiachun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:3x1.5ml 英文名稱：Methyl Alcohol

鹽suan哌jia酯E異構(gòu)體溶液標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:0．5ml 英文名稱：

lv化標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Choline Chloride

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