PI溶液(1mg/ml)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9683

英文名稱：Propidium Iodide Solution

產(chǎn)品規(guī)格：1ml

貨號：FS-X9683

產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品為PI水溶液，濃度為1mg/ml。使用時根據(jù)實驗不同直接將本產(chǎn)品用相應溶液稀釋到工作濃度。

碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)是一種可對DNA 染色的細胞核染色試劑。它是一種溴化乙啶的類似物，在嵌入雙鏈DNA 后釋放紅色熒光。PI 不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。PI 經(jīng)常被用來與Calcein-AM 或者FDA 等熒光探針一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA 復合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535 nm 和615 nm。常用于流式細胞儀分析和顯微鏡觀察，檢測細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)。

別名：碘化丙啶溶液

號：25535-16-4

分子式：C27H34I2N4

分子量：668.39

儲存條件：-20℃，有效期至少2年

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

細胞周期D2(Cyclin-D2)英文名：Cyclin-D2 AICAR?；D(zhuǎn)移抗體包裝5MG

細胞周期D1(Cyclin-D1)英文名：Cyclin-D1 磷化毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥突變蛋白抗體包裝1g

細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3(SOCS-3)英文名：SOCS-3 ATP5E蛋白抗體包裝250mg

細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子1(SOCS-1)英文名：SOCS-1 ATP5G2蛋白抗體包裝25g

細胞外信號調(diào)節(jié)激(ERK)英文名：ERK ATP6V0D2蛋白抗體包裝5g

C(Cyt-C)英文名：Cyt-C ATP6V1B2蛋白抗體包裝1g

細胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)英文名：CYFRA21-1 ATPIF1蛋白抗體包裝5g

細胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)英文名：CK 18-M65 Attractin蛋白抗體包裝10mg

細胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)英文名：CK 18-M30 磷化有絲分裂激B抗體包裝50mg

細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)英文名：ICAM-3/CD50 肌動蛋白相關(guān)蛋白M1抗體包裝100mg

細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)英文名：ICAM-2/CD102 ALKB蛋白抗體包裝1g

細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)英文名：ICAM-1/CD54 乙酰?；D(zhuǎn)移1抗體包裝5g

細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)英文名：CTLA-4/CD152 磷化β-肌動蛋白抗體包裝250g

硒蛋白M(SELM)英文名：SELM 磷化腎上腺能受體β2/β2-AR 抗體包裝25g

戊糖(Pentosidine)英文名：Pentosidine 磷化腎上腺能受體β2/β2-AR抗體包裝5g

激活受體相互作用蛋白1抗體白介6(IL6)RTA-408 是一種抗氧化炎癥調(diào)節(jié)劑 (AIM)，可激活 Nrf2 并抑制一氧化氮 (NO)。RTA-408 通過抑制 STING 依賴的
PI溶液(1mg/ml)黑紫紅菇間羥基苯酮Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激1

葡萄座腔屬三氟酮酸甲酯Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激2

傳染性喉氣管炎病 1-[2-氨基-1-(4-甲氧基苯基)乙基]環(huán)己鹽酸鹽Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激5

齒雙歧桿 1,8-萘內(nèi)酰亞RNA結(jié)合基序蛋白6

枯草芽孢桿 N-Fmoc-L-天冬氨酸-1-叔丁酯RNA聚合轉(zhuǎn)錄終止因子Ⅰ

副豬嗜血桿 1,1'-二茂鐵甲酸R-脊椎蛋白2

糞產(chǎn)堿糞亞種 3-甲硫基苯酸S100A11鈣結(jié)合蛋白

小孢根霉華變種敵百畝/二甲基二硫代氨酸鈉二水合物S100A12鈣結(jié)合蛋白

根瘤二茂鐵甲S100A14鈣結(jié)合蛋白

嗜熱脂肪地芽孢桿蔗糖酯S100鈣結(jié)合蛋白B

枯草芽孢桿 S-100蛋白

矩圓黑盤孢十四烷酸乙酯S100鈣結(jié)合蛋白A8;A9復合物

鮭色鎖擲酵母間苯二異酸酯S100鈣結(jié)合蛋白A9

腸道致病性大腸埃希氏 3,5-二氟苯乙酮Salusinα蛋白

梭 SAX1蛋白

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