Hoechst 33258 染色液(即用型)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9684

中文名稱：Hoechst 33258 染色液(即用型)

英文名稱：Hoechst 33258 Stain solution(ready-to-use)

產(chǎn)品規(guī)格：10ml|50mL

貨號(hào)：FS-X9684

產(chǎn)品介紹:

本Hoechst 33258染色液可直接用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

號(hào)：23491-45-4

分子式：C25H24N6O·3HCl

分子量：533.88

儲(chǔ)存條件：-20℃避光，有效期一年

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

胃泌(Gastrin)英文名：Gastrin 載脂蛋白D抗體包裝5g

胃泌(GAS)英文名：GAS 敏感離子通道1抗體包裝1g

胃動(dòng)(MTL)英文名：MTL 雙鏈RNA腺苷脫基抗體（C端）包裝100ml

胃動(dòng)(MOT)英文名：MOT 髓系、淋巴、混合系白血病易位基因10抗體包裝25ml

胃蛋白(PG)英文名：PG 腺苷環(huán)化1抗體包裝100g

胃蛋白(Pepsin)英文名：Pepsin 腺瘤樣息肉抗體包裝25g

維生K1(VK1)英文名：VK1 溶血磷脂?；D(zhuǎn)移抗體包裝500g

維生E(VE)英文名：VE 錨蛋白重復(fù)及SAM結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體包裝1g

維生D3(VD3)英文名：VD3 磷化間變型淋巴瘤激抗體包裝5g

維生D2(VD2)英文名：VD2 酰基脫氫很長(zhǎng)鏈抗體包裝25g

維生D(VD)英文名：VD 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)銜接結(jié)合蛋白抗體包裝5g

維生C(VC)英文名：VC 錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族3抗體包裝1g

維生B6(VB6)英文名：VB6 有絲分裂激B抗體包裝5g

維生B12(VB12)英文名：VB12 磷化Ack1抗體包裝1g

維生A(VA)英文名：VA 磷化Ack1抗體包裝5g

固類還原家族7成員A2抗體白介6(IL6)AZD-5438 是有效的 CDK1/2/9 抑制劑，IC50 值分別為 16 nM/6 nM/20 nM；對(duì)GSK3β，CDK5，CDK6的抑制作用較弱。&n
Hoechst 33258 染色液(即用型)不動(dòng)桿屬 2-苯氨基乙Sestrin 2蛋白

爪哇根霉 4-正丁氧基SH3YL1

釀酒酵母對(duì)乙酰氨基苯甲SPRED1

畢赤酵母肉桂酸異丁酯STAT3蛋白抑制分子

鴨疫里氏桿 N,N'-二芐基乙二二乙酯S-腺苷

燼灰紅鏈霉?fàn)a灰紅亞種對(duì)羥基二苯s腺苷同型半

偽狂犬病病 2--4-硝苯Tamm-Horsfall蛋白

運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 N,N-二甲基間甲苯TARDNA結(jié)合蛋白43

褐頂環(huán)柄菇 2-氨基-5-硝基噻唑Tau蛋白

枯草芽孢桿 4-氨基-6--1,3-苯二磺酰TIM-1

米曲霉 4-正戊(烷)基苯酸Toll樣受體2

赭色擲孢酵母三苯基-氫氧化鈉加合物(的水溶液)Toll樣受體4

石榴嗜藍(lán)孢孔 N,N-二異基乙二Toll樣受體6

釀酒酵母 4-硝苯-2-磺酸Toll樣受體7

Atopobium vaginae 2-咪唑烷酮Toll樣受體9

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