細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9584

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)	JC-1 Apoptosis Detection Kit	10T\|20T\|50T\|100T	FS-X9584

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒可應(yīng)用于細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測(cè)。大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過程中早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

本試劑盒采用JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)一種陽離子脂質(zhì)熒光染料作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)，在低濃度時(shí)以單體的形式存在，高濃度時(shí)以多聚體形式存在，兩者的發(fā)射光譜不同，但均可在流式細(xì)胞儀綠色（FL-1）通道檢測(cè)出綠色熒光，JC-1可透過正常細(xì)胞膜以單體狀態(tài)聚集胞內(nèi)，正常健康線粒體的膜電位（△?）具有極性，JC-1依賴于△?的極性被迅速攝入線粒體內(nèi)，并因濃度增高而在線粒體內(nèi)形成多聚體，多聚體發(fā)射光為紅色熒光；可被流式細(xì)胞儀的紅色（FL-2）通道檢測(cè)到，而細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強(qiáng)度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。根椐這一特征檢測(cè)線粒體膜電位的變化。

注意事項(xiàng)

1. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。

2. JC-1 避光保存及使用。

3. 細(xì)胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細(xì)胞量在1×106/Test。

4. 對(duì)PH 變化過于敏感的細(xì)胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長(zhǎng)觀測(cè)時(shí)間。

5. 流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導(dǎo)劑、細(xì)胞株類型，作用時(shí)間的不同而熒光強(qiáng)度比例都有不同，因此沒有通用標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)償設(shè)門指南，因此每個(gè)試驗(yàn)需設(shè)陰性及陽性對(duì)照組進(jìn)行熒光補(bǔ)償及設(shè)門。

6. 組織需先制備單細(xì)胞懸液或提取純化線粒體后方可進(jìn)行檢測(cè)，可選用我司細(xì)胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

Endoglin蛋白(ENG)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ENG ELISA Kit，ENG，

耳石蛋白1(OTOL1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：OTOL1 ELISA Kit，OTOL1，

電壓依賴性陰離子通道蛋白1(VDAC1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：VDAC1 ELISA Kit，VDAC1，

多巴an受體D1(DRD1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DRD1 ELISA Kit，DRD1，

蛋白激meiCγ(PKCγ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PKCγ ELISA Kit，PKCγ，

單鏈選擇性單功能嘧啶DNA糖基化mei1(SMUG1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SMUG1 ELISA Kit，SMUG1，

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體樣蛋白1(FGFRL1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：FGFRL1 ELISA Kit，F(xiàn)GFRL1，

層粘連蛋白α1(LAMα1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：LAMα1 ELISA Kit，LAMα1，

suan脫氫mei激mei同工mei4(PDK4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PDK4 ELISA Kit，PDK4，

胞裂蛋白11(SEPT11)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SEPT11 ELISA Kit，SEPT11，

半胱氨suan蛋白mei抑制劑A(CSTA)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CSTA ELISA Kit，CSTA，

白介su2受體α(IL2Rα)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：IL2Rα ELISA Kit，IL2Rα，

肌氨suan脫氫mei(SARDH)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SARDH ELISA Kit，SARDH，

核糖核suanmeiK(RNASEK)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：RNASEK ELISA Kit，RNASEK，

黑su轉(zhuǎn)鐵蛋白(MFI2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MFI2 ELISA Kit，MFI2，

含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：vWA3A ELISA Kit，vWA3A，

過氧化還原mei4(PRDX4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：PRDX4 ELISA Kit，PRDX4，
細(xì)胞凋亡線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒(JC-1)西酞普蘭相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

硬脂suan紅霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Erythromycin Stearate

ben磺suan阿曲庫an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Atracurium Besylate

jiasuan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：Formic Acid

乙chun測(cè)定用乙chun對(duì)照溶液標(biāo)準(zhǔn)品（乙chun水溶液）

規(guī)格:5mlX5ampules 英文名稱：Alcohol Determination--Alcohol

乙chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2mLx5ampules 英文名稱：Alcohol

鹽suan地匹福林標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Dipivefrin Hydrochloride

阿莫地喹鹽suan鹽標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Amodiaquine Hydrochloride

麥角異an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Ergotaminine (List Chemical)

吲達(dá)帕an相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。