XTT細(xì)菌增殖及細(xì)菌毒性檢測試劑-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9589

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：XTT細(xì)菌增殖及細(xì)菌毒性檢測試劑

英文名稱：XTT Bacteria Proliferation and Cytotoxicity Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

貨號：FS-X9589

產(chǎn)品介紹:

XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，活細(xì)菌線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶，可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲月贊。生成的甲臜能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，不形成顆粒，可直接用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測定吸光值。

操作方法

1. 96 孔板加入細(xì)菌100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)菌培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4. 向各孔中加入20 μl 的XTT 工作液。

5. 37℃下孵育1~4 小時。

6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

多巴an-β羥化mei(DBH)elisa檢測試劑盒英文名稱：DBH ELISA Kit，DBH，

低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1(LRP-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：LRP-1 ELISA Kit，LRP-1，

膽suan(CA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CA ELISA Kit，CA，

促腎上腺皮質(zhì)激su釋放因子(CRF)elisa檢測試劑盒英文名稱：CRF ELISA Kit，CRF，

腦腸肽(BGP/Gehrelin)elisa檢測試劑盒英文名稱：BGP/Gehrelin ELISA Kit，BGP/Gehrelin，

磷脂酰乙chun(PEth)elisa檢測試劑盒英文名稱：PEth ELISA Kit，PEth，

免疫球蛋白A(IgA)elisa檢測試劑盒英文名稱：IgA ELISA Kit，IgA，

粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)elisa檢測試劑盒英文名稱：G-CSF ELISA Kit，G-CSF，

可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit，VEGFR-2/sFLK-1，

人抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)elisa檢測試劑盒英文名稱：EMAb ELISA Kit，EMAb，

人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)elisa檢測試劑盒英文名稱：dsDNA ELISA Kit，dsDNA，

人抗酒石suansuan性磷suanmei5b(TRACP-5b)elisa檢測試劑盒英文名稱：TRACP-5b ELISA Kit，TRACP-5b，

人抗補體1q抗體(C1q)elisa檢測試劑盒英文名稱：C1q ELISA Kit，C1q，

精氨suan脫羧mei(ADC)elisa檢測試劑盒英文名稱：ADC ELISA Kit，ADC，

降鈣su原(PCT)elisa檢測試劑盒英文名稱：PCT ELISA Kit，PCT，

促胰液su受體(SCTR)檢測試劑盒 forSecretinReceptor(SCTR)

前列腺suE合mei2(PTGES2)檢測試劑盒 forProstaglandinESynthase2(PTGES2)
XTT細(xì)菌增殖及細(xì)菌毒性檢測試劑非那西汀熔點標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：

丙戊suan相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

醋suan去氨加壓su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.91mg 英文名稱：

羥可待tong鑒別標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:15mg 英文名稱：Oxytocin Identification

鹽suan多巴an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Dopamine Hydrochloride

磺an醋酰鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Sulfacetamide Sodium

鹽suan環(huán)ben扎林標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cyclobenzaprine Hydrochloride

地紅霉su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Dirithromycin

奧克立林標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Octocrylene

L-亮氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：L-Leucine
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)