CCK-8法細(xì)胞增殖檢測試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9590

產(chǎn)品介紹：

此試劑盒是用于測定細(xì)胞增殖或毒性試驗中活細(xì)胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。實驗的靈敏度比其它如MTT, XTT 或MTS 高。由于新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液相當(dāng)穩(wěn)定，并且對細(xì)胞沒有毒性，可直接加入到細(xì)胞樣品中長時間孵育。

操作方法

1. 96 孔板加入細(xì)胞100μL/孔（約1×104），置37℃ 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃，含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4. 向各孔中加入10 μl 的新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液。

5. 37℃下孵育1～4 小時。

6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長處檢測每孔的光密度。

結(jié)果分析

1. 細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加新型細(xì)胞增殖及毒性檢測溶液，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

2. 求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
CCK-8法細(xì)胞增殖檢測試劑盒	英文名稱	500T	FS-X9590

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實驗。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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沙利鉑相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

托西溴芐an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Bretylium Tosylate

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