CFDA,SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9591

操作步驟：

1、貼壁細胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細胞，盡量去除細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
CFDA,SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒	CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit	1000T	FS-X9591

產(chǎn)品介紹：

CFSE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細胞增殖檢測和細胞熒光示蹤的檢測試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細胞增殖檢測方法。

基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結(jié)果*一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細胞的其它相關(guān)信息。

CFDA SE 的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47。CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)個月。CFSE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細胞。

CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。

注意事項：

1、本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。

9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)檢測試劑盒 forVascularEndothelialGrowthFactor165(VEGF165)

突觸融合蛋白17(STX17)檢測試劑盒 forSyntaxin17(STX17)

蛋白激meiBγ(PKBγ)檢測試劑盒 forProteinKinaseBGamma(PKBg)

腎損傷分子1(Kim1)檢測試劑盒 forKidneyInjuryMolecule1(Kim1)

基質(zhì)金屬蛋白mei13(MMP13)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase13(MMP13)

肌糖δ(SGCδ)檢測試劑盒 forSarcoglycanDelta(SGCd)

亮氨suan豐富α2-糖蛋白1(LRG1)檢測試劑盒 forLeucineRichAlpha-2-Glycoprotein1(LRG1)

叉頭框蛋白O1(FOXO1)檢測試劑盒 forForkheadBoxProteinO1(FOXO1)

TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子2(TAF2)檢測試劑盒 forTATABoxBindingProteinAssociatedFactor2(TAF2)

轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorAlpha(TGFa)

肝配蛋白A4(EFNA4)檢測試劑盒 forEphrinA4(EFNA4)

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBeta2(TGFb2)

胰島su樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)檢測試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactorBindingProtein4(IGFBP4)

羧肽meiA3(CPA3)檢測試劑盒 forCarboxypeptidaseA3,MastCell(CPA3)

硒磷suan合成mei1(SEPHS1)檢測試劑盒 forSelenophosphateSynthetase1(SEPHS1)

C反應(yīng)蛋白(CRP)檢測試劑盒 forCReactiveProtein(CRP)

溶質(zhì)載體家族30成員7(SLC30A7)檢測試劑盒 forSoluteCarrierFamily30Member7(SLC30A7)
CFDA,SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒噻康zuo相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:25mg 英文名稱：Tioconazole Related Compound A

乙酰半胱氨suan標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Acetylcysteine

jia芬那suanjia芬那suan標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mefenamic Acid

來fumi特相關(guān)物質(zhì)C標準品規(guī)格:10mg 英文名稱：

糖精鈉標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：Saccharin Sodium

土霉su標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Oxytetracycline

沙利鉑相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：

鹽suan阿的平標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Quinacrine Hydrochloride

槲皮su標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Quercetin

鹽suan普魯卡因an標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Procainamide Hydrochloride