Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9593

產(chǎn)品介紹:

AlamaBlue 細胞活力檢測試劑盒提供了一種可靠、靈敏、安全和低成本的快速有效檢測細胞活力與毒性的方法。AlamaBlue 通過在細胞生長的培養(yǎng)基中所產(chǎn)生的化學(xué)還原反應(yīng)，將非熒光信號的染料轉(zhuǎn)換成為一紅色熒光物質(zhì)，試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），從而檢測細胞的存活率。維持細胞需要還原性環(huán)境而抑制生長則表現(xiàn)為氧化型環(huán)境。細胞生長率相關(guān)的降低可表現(xiàn)為氧化還原指示劑從氧化型（非熒光素、紫色）轉(zhuǎn)為還原型（熒光素、紅色）。該熒光信號可以用530~560nm 的激發(fā)波激發(fā)，在590nm 處可以獲發(fā)射波，檢測570 和600nm 的的吸光度值，校正監(jiān)測值，可以減去相應(yīng)的570nm 和600nm 的背景吸光度值。檢測所產(chǎn)生的熒光信號是與樣品中的活細胞數(shù)成正比的。

AlamaBlue 細胞活性檢測試劑盒的靈敏度相似于[3H]胸苷法檢測細胞增殖法。根據(jù)不同類型的細胞，AlamaBlue 可以檢測到至少40個細胞，同時保證很好的重現(xiàn)性和靈敏度。作為試鹵靈（紫紅、紅色熒光）可以進一步被還原為水解化的試鹵靈（無色、無熒光），當細胞數(shù)量增多，所有的刃天青（7-羥基-3-羰基-10-氧化-三氫吩惡嗪）被轉(zhuǎn)換為試鹵靈（9-羥基-3-異吩惡嗪酮7-羥基-3H-吩惡嗪-3-酮），試劑盒的信號反而會發(fā)生衰減。因此，對于您所用的試劑盒來說，針對不同的細胞類型，應(yīng)該調(diào)整您的細胞數(shù)，做相應(yīng)的優(yōu)化，才能得到更好的結(jié)果。

操作說明

以下操作可用作通用指導(dǎo)建議?？紤]不同細胞類型與培養(yǎng)條件的差異性，有必要根據(jù)實際情況優(yōu)化您的操作步驟。

1. 96 孔細胞培養(yǎng)板每孔100μL 培養(yǎng)基飼養(yǎng)細胞，控制細胞數(shù)目在40~10000 個/貼壁細胞，2000~500000 個/懸浮細胞。設(shè)置空培養(yǎng)基做對照。

2. 加入10μL AlamaBlue 溶液至培養(yǎng)基中，37 度孵育：24 小時（比色法讀數(shù)）；5-6 小時（熒光讀數(shù)）。

3. 檢測570nm 和600nm 的吸光度，或者用熒光微孔板讀數(shù)530nm 激發(fā)，590nm 發(fā)射波讀數(shù)。

4. 如果采用比色法檢測，選擇OD570-OD600 檢測，如果檢測熒光信號，請在校正OD 值后，先設(shè)置標準曲線，選擇合適您實驗的細胞佳濃度。

中文名稱：Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

英文名稱：AlamaBlue Cell Viability Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號：FS-X9593

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

乙酰轉(zhuǎn)移mei(ChAT)檢測試劑盒 forCholineAcetyltransferase(ChAT)

顆粒體蛋白(GRN)檢測試劑盒 forGranulin(GRN)

肌球蛋白ⅩⅨ(MYO19)檢測試劑盒 forMyosinXIX(MYO19)

透明質(zhì)suan結(jié)合蛋白1(HABP1)檢測試劑盒 forHyaluronanBindingProtein1(HABP1)

血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)檢測試劑盒 forThrombomodulin(TM)

半胱氨suan蛋白mei抑制劑1(CST1)檢測試劑盒 forCystatin1(CST1)

黏病毒耐藥蛋白2(MX2)檢測試劑盒 forMyxovirusResistance2(MX2)

白介su1δ(FIL1δ)檢測試劑盒 forInterleukin1Delta(FIL1d)

IgE-Fc片段受體Ⅱ(FcεRⅡ)檢測試劑盒 forReceptorIIForTheFcRegionOfImmunoglobulinE(FceRII)

G抗原10(GAGE10)檢測試劑盒 forGAntigen10(GAGE10)

Neurobeachin蛋白(NBEA)檢測試劑盒 forNeurobeachin(NBEA)

S100鈣結(jié)合蛋白B(S100B)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinB(S100B)

胰蛋白mei原激活肽(TAP)檢測試劑盒 forTrypsinogenActivationPeptide(TAP)

S100鈣結(jié)合蛋白A7(S100A7)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinA7(S100A7)

信號淋巴細胞激活分子家族成員7(SLAMF7)檢測試劑盒 forSignalingLymphocyticActivationMoleculeFamily,Member7(SLAMF7)

互生蛋白α1(SNTα1)檢測試劑盒 forSyntrophinAlpha1(SNTa1)

骨橋su(OPN)檢測試劑盒 forOsteopontin(OPN)
Alarma Blue細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒酒石suan鈉標準品規(guī)格:500mg×4vials 英文名稱：Sodium Tartrate Dihydrate

左美丙嗪標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methotrimeprazine

雷特標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Ceforanide

半乳糖chun標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Galactitol

比林標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Antipyrine

jia氧芐啶相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:25mg 英文名稱：

力農(nóng)標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Amrinone

膽影suan標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Iodipamide

jia硫咪zuo標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methimazole

奧沙標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Oxazepam CIV

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