Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9534

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒	Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit	20次\|50次	FS-X9534

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒是用EGFP標(biāo)記的重組人Annexin V來檢測細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面的磷酯酰絲氨suan的一種細(xì)胞凋亡檢測試劑盒。一個(gè)包裝的本試劑盒共可以檢測20個(gè)樣品?？梢允褂昧魇郊?xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測設(shè)備進(jìn)行檢測。

試劑盒組份：

Annexin V-EGFP—————————100μl

Annexin V-EGFP結(jié)合液——————12ml

碘化丙啶染色液—————————220μl

Annexin是一類廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞漿內(nèi)鈣離子依賴的磷酯結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。但僅Annexin V被報(bào)道可以調(diào)控一些PKC的活性。

Annexin V選擇性結(jié)合磷酯酰絲氨suan(phosphatidylserine，簡稱PS)。磷酯酰絲氨suan主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會(huì)把磷酯酰絲氨suan外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷酯酰絲氨suan暴露到細(xì)胞表面后會(huì)促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而Annexin V和外翻到細(xì)胞表面的磷酯酰絲氨suan結(jié)合后可以阻斷磷酯酰絲氨suan的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。

用帶有綠色熒光的熒光探針EGFP標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-EGFP，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷酯酰絲氨suan的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。

本試劑盒還提供了碘化丙啶染色液，碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，Annexin V-EGFP可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷酯酰絲氨suan結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。

綜上所述，用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后，正常的活細(xì)胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色；凋亡早期的細(xì)胞僅被Annexin V-EGFP染色，碘化丙啶染色呈陰性；壞死細(xì)胞和凋亡晚期的細(xì)胞可以同時(shí)被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。

儲存條件：4℃避光，有效期6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

核糖核suan外切mei3(ERI3)檢測試劑盒 forExoribonuclease3(ERI3)

高爾基體蛋白A4(GOLGA4)檢測試劑盒 forGolginA4(GOLGA4)

無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(WNT3A)檢測試劑盒 forWinglessTypeMMTVIntegrationSiteFamily,Member3A(WNT3A)

防御suβ121(DEFβ121)檢測試劑盒 forDefensinBeta121(DEFb121)

氨jia基轉(zhuǎn)移mei(AMT)檢測試劑盒 forAminomethyltransferase(AMT)

CD320分子(CD320)檢測試劑盒 forClusterOfDifferentiation320(CD320)

著絲粒蛋白F(CENPF)檢測試劑盒 forCentromereProteinF(CENPF)

Ⅲ型膠原(COL3)檢測試劑盒 forCollagenTypeIII(COL3)

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移mei1(GALNT1)檢測試劑盒 forPolypeptide-N-Acetylgalactosaminyltransferase1(GALNT1)

分泌型磷蛋白2(SPP2)檢測試劑盒 forSecretedPhosphoprotein2(SPP2)

meiⅡ(CA2)檢測試劑盒 forCarbonicAnhydraseII(CA2)

腦鈉su(BNP)檢測試劑盒 forBrainNatriureticPeptide(BNP)

半胱氨suan蛋白mei抑制劑5(CST5)檢測試劑盒 forCystatin5(CST5)

抗Ⅱ型膠原蛋白抗體(Anti-CⅡAb)檢測試劑盒 forAnti-TypeIICollagenAntibody(Anti-CIIAb)

干擾suα(IFNα)檢測試劑盒 forInterferonAlpha(IFNa)

端錨聚合mei1(TNKS1)檢測試劑盒 forTankyrase1(TNKS1)

溶血脂?；D(zhuǎn)移mei1(LPCAT1)檢測試劑盒 forLysophosphatidylcholineAcyltransferase1(LPCAT1)
Annexin V-EGFP細(xì)胞凋亡檢測試劑盒硬脂suan聚乙二chun50標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Polyoxyl 50 Stearate

硬脂suan聚乙二chun40標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Polyoxyl 40 Stearate

油suan聚烴氧酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Polyoxyl Oleate

jia基纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Methylcellulose (AS)

羥丙基jia基纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：

羥丙基纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Hydroxypropyl Cellulose

乙基纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Ethylcellulose

葡聚糖1標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Dextran 1

葡聚糖T-10標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Dextran T-10

葡聚糖40標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：Dextran 40

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的*細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。