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APC-Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間：2022-05-09 11:38:59瀏覽次數(shù)：165次

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貨號(hào) FS-X9596
APC-Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)正在熱銷的產(chǎn)品：內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖mei（Cx）測試盒 規(guī)格：100管/48樣 測試方法：微量法
內(nèi)切-β-1，4-葡聚糖mei（Cx）測試盒 規(guī)格：50管/24樣 測試方法：可見分光光度法
外切-β-1，4-葡聚糖mei（C1）測試盒 規(guī)格：100管/48樣 測試方法：微量法
外切-β-1，4-葡聚糖mei（C1）測試盒 規(guī)格

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒細(xì)胞增殖檢測是一個(gè)基于熒光檢測的實(shí)驗(yàn)，可以監(jiān)測細(xì)胞健康和通過胸苷摻合來估量DNA 合成從而監(jiān)測細(xì)胞分裂。

溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類似物。BrdU 通常被用于檢測活組織中再生的細(xì)胞。

BrdU 可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA 中（在細(xì)胞周期S 期），在DNA 復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測這個(gè)插入的化學(xué)品，從而檢測出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。

中文名稱：APC-Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)

英文名稱：BrdU cell proliferation Detection Kit

產(chǎn)品規(guī)格：20T

貨號(hào)：FS-X9596

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

Nicastrin蛋白(NCSTN)檢測試劑盒  forNicastrin(NCSTN)    

氨酰tRNA合成mei復(fù)合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)檢測試劑盒  forAminoacyltRNASynthetaseComplexInteractingMultifunctionalProtein1(AIMP1)    

F-框蛋白32(FBXO32)檢測試劑盒  forF-BoxProtein32(FBXO32)    

硫氧還蛋白還原mei1(TrxR1)檢測試劑盒  forThioredoxinReductase1(TrxR1)    

鐵調(diào)su(Hepc)檢測試劑盒  forHepcidin(Hepc)    

層黏連蛋白α5(LAMα5)檢測試劑盒  forLamininAlpha5(LAMa5)    

轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(TNPO1)檢測試劑盒  forTransportin1(TNPO1)    

干細(xì)胞因子(SCF)檢測試劑盒  forStemCellFactor(SCF)    

90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)檢測試劑盒  forHeatShockProtein90kDaAlphaA1(HSP90aA1)    

巰基suan硫轉(zhuǎn)移mei(MPST)檢測試劑盒  forMercaptopyruvateSulfurtransferase(MPST)    

抗神經(jīng)節(jié)脂M1抗體(Anti-GM1)檢測試劑盒  forAnti-GangliosideM1Antibody(Anti-GM1)    

神經(jīng)激肽A(NKA)檢測試劑盒  forNeurokininA(NKA)    

載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒  forApolipoproteinA4(APOA4)    

肥大細(xì)胞類糜蛋白mei1(CMA1)檢測試劑盒  forChymase1,MastCell(CMA1)    

絲氨suan組合因子5(SERINC5)檢測試劑盒  forSerineIncorporator5(SERINC5)    

腎上腺髓質(zhì)su2(ADM2)檢測試劑盒  forAdrenomedullin2(ADM2)    

NK6同源框蛋白1(NKX6-1)檢測試劑盒  forNK6HomeoboxProtein1(NKX6-1)    
APC-Brdu細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)環(huán)孢junsu標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:50mg  英文名稱：Cyclosporine

酒石suan啡諾標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:500mg  英文名稱：Levorphanol Tartrate CII

煙suan標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Niacin

乙酰zuoan標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:2g  英文名稱：Acetazolamide

酒石suan雙氫標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Dihydrocodeine Bitartrate CII

甘羅溴an甘羅溴an標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Glycopyrrolate

異卡波肼標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Isocarboxazid

二乙suan熒光su標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Diacetylfluorescein

醋suanjia地孕tong標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:500mg  英文名稱：Megestrol Acetate

消旋蛋氨suan標(biāo)準(zhǔn)品  規(guī)格:200mg  英文名稱：Racemethionine

 


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