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TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 10:20:57瀏覽次數(shù):147次

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貨號 FS-X9535
TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品:轉(zhuǎn)氫mei-2試劑盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:紫外分光光度法
線粒體分離和線粒體mei提取試劑盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:差速離心法
超氧化物歧化mei(SOD)試劑盒 規(guī)格:100管/96樣 測試方法:微量法
超氧化物歧化mei(SOD)測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:可見分光光度法
過氧化氫mei(CAT)試劑盒

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒可以用于TUNEL檢測陽性對照的制備,制備后的陽性對照可以用于一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT135)的熒光,也可以用于顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT137)的顯色檢測。DNase I可以剪切基因組DNA,使基因組DNA產(chǎn)生片段化(fragmentation)。基因組被片段化的細胞在用TUNEL法檢查時會呈陽性染色。本試劑盒足夠制備10個陽性對照。

試劑盒組份:

DNase I—————————10μl

Reaction Buffer(10X)——200μl

注意事項:需自備用于TUNEL檢測的組織切片、或培養(yǎng)細胞的片子。需自備TUNEL檢測試劑盒。

中文名稱:TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒

英文名稱:Positive control preparation kit for TUNEL detection

產(chǎn)品規(guī)格:10次

貨號:FS-X9535

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

RNA結(jié)合基元蛋白24(RBM24)檢測試劑盒  forRNABindingMotifProtein24(RBM24)    

神經(jīng)型一氧化氮合mei(NOS1)檢測試劑盒  forNitricOxideSynthase1,Neuronal(NOS1)    

載脂蛋白C1(APOC1)檢測試劑盒  forApolipoproteinC1(APOC1)    

粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒  forMucin1(MUC1)    

細胞色suP450家族成員26A1(CYP26A1)檢測試劑盒  forCytochromeP45026A1(CYP26A1)    

上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒  forCadherin,Epithelial(CDHE)    

胰高血糖su樣肽1(GLP1)檢測試劑盒  forGlucagonLikePeptide1(GLP1)    

/肺/鼻上皮癌關聯(lián)蛋白(PLUNC)檢測試劑盒  forPalate/LungAndNasalEpitheliumAssociatedProtein(PLUNC)    

腺高半胱氨suan水解mei(AHCY)檢測試劑盒  forAdenosylhomocysteinase(AHCY)    

脫氧核糖核suanmeiⅠ樣2(DNASE1L2)檢測試劑盒  forDeoxyribonucleaseILikeProtein2(DNASE1L2)    

白介su6(IL6)檢測試劑盒  forInterleukin6(IL6)    

結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒  forConnectiveTissueGrowthFactor(CTGF)    

Pim-3原癌基因(PIM3)檢測試劑盒  forPim-3Oncogene(PIM3)    

膜聯(lián)蛋白A7(ANXA7)檢測試劑盒  forAnnexinA7(ANXA7)    

血管生成su2(ANGPT2)檢測試劑盒  forAngiopoietin2(ANGPT2)    

肝配蛋白A3(EFNA3)檢測試劑盒  forEphrinA3(EFNA3)    

suan酯mei3(CES3)檢測試劑盒  forCarboxylesterase3(CES3)    
TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒葡聚糖40系統(tǒng)適用性用標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Dextran 40 System Suitability

葡聚糖70標準品  規(guī)格:50mg  英文名稱:Dextran 70

葡聚糖70系統(tǒng)適用性用標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Dextran 70 System Suitability

右旋糖酐死體積標記物標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran Vo Marker

葡聚糖4校準用標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran 4 Calibration

葡聚糖10校準用標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran 10 Calibration

葡聚糖40校準用標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran 40 Calibration

葡聚糖70校準用標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran 70 Calibration

葡聚糖250校準用標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:Dextran 250 Calibration

花旗參精粉標準品  規(guī)格:1.5g  英文名稱:

 


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