當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒
貨號 | FS-X9535 |
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產(chǎn)品介紹:
本試劑盒可以用于TUNEL檢測陽性對照的制備,制備后的陽性對照可以用于一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT135)的熒光,也可以用于顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT137)的顯色檢測。DNase I可以剪切基因組DNA,使基因組DNA產(chǎn)生片段化(fragmentation)。基因組被片段化的細胞在用TUNEL法檢查時會呈陽性染色。本試劑盒足夠制備10個陽性對照。 試劑盒組份: DNase I—————————10μl Reaction Buffer(10X)——200μl 注意事項:需自備用于TUNEL檢測的組織切片、或培養(yǎng)細胞的片子。需自備TUNEL檢測試劑盒。 |
中文名稱:TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒
英文名稱:Positive control preparation kit for TUNEL detection
產(chǎn)品規(guī)格:10次
貨號:FS-X9535
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
RNA結(jié)合基元蛋白24(RBM24)檢測試劑盒 forRNABindingMotifProtein24(RBM24)
神經(jīng)型一氧化氮合mei(NOS1)檢測試劑盒 forNitricOxideSynthase1,Neuronal(NOS1)
載脂蛋白C1(APOC1)檢測試劑盒 forApolipoproteinC1(APOC1)
粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒 forMucin1(MUC1)
細胞色suP450家族成員26A1(CYP26A1)檢測試劑盒 forCytochromeP45026A1(CYP26A1)
上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒 forCadherin,Epithelial(CDHE)
胰高血糖su樣肽1(GLP1)檢測試劑盒 forGlucagonLikePeptide1(GLP1)
腭/肺/鼻上皮癌關聯(lián)蛋白(PLUNC)檢測試劑盒 forPalate/LungAndNasalEpitheliumAssociatedProtein(PLUNC)
腺高半胱氨suan水解mei(AHCY)檢測試劑盒 forAdenosylhomocysteinase(AHCY)
脫氧核糖核suanmeiⅠ樣2(DNASE1L2)檢測試劑盒 forDeoxyribonucleaseILikeProtein2(DNASE1L2)
白介su6(IL6)檢測試劑盒 forInterleukin6(IL6)
結(jié)締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒 forConnectiveTissueGrowthFactor(CTGF)
Pim-3原癌基因(PIM3)檢測試劑盒 forPim-3Oncogene(PIM3)
膜聯(lián)蛋白A7(ANXA7)檢測試劑盒 forAnnexinA7(ANXA7)
血管生成su2(ANGPT2)檢測試劑盒 forAngiopoietin2(ANGPT2)
肝配蛋白A3(EFNA3)檢測試劑盒 forEphrinA3(EFNA3)
羧suan酯mei3(CES3)檢測試劑盒 forCarboxylesterase3(CES3)
TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒葡聚糖40系統(tǒng)適用性用標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Dextran 40 System Suitability
葡聚糖70標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:Dextran 70
葡聚糖70系統(tǒng)適用性用標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Dextran 70 System Suitability
右旋糖酐死體積標記物標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran Vo Marker
葡聚糖4校準用標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran 4 Calibration
葡聚糖10校準用標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran 10 Calibration
葡聚糖40校準用標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran 40 Calibration
葡聚糖70校準用標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran 70 Calibration
葡聚糖250校準用標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Dextran 250 Calibration
花旗參精粉標準品 規(guī)格:1.5g 英文名稱:
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