一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9536

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡便的細(xì)胞凋亡檢測方法。對于經(jīng)過固定和洗滌的細(xì)胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應(yīng)，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測到呈現(xiàn)綠色熒光的凋亡細(xì)胞。本試劑盒足夠檢測20個樣品。

試劑盒組份：

TdT酶——————————40μl

熒光標(biāo)記液————————960μl

TdT酶稀釋液(選用)————500μl

細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase,TdT)的催化下加上綠色熒光探針熒光素(FITC)標(biāo)記的dUTP(fluorescein-dUTP)，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理。注：FITC是fluorescein isothiocyanate的縮寫，實(shí)際上大多數(shù)情況下所謂的FITC即為fluorescein。

本試劑盒有如下優(yōu)點(diǎn)。

(1)高靈敏度：背景染色極低，陽性染色明亮，可以在單細(xì)胞水平檢測到細(xì)胞凋亡，同時由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測到早期的細(xì)胞凋亡。

(2)特異性：TUNEL檢測時通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。

(3)快速：僅需約1-2個小時即可完成。

(4)方便：只需一步染色反應(yīng)，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進(jìn)行多步操作。

(5)應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。

TUNEL法特異性檢測細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生的DNA斷裂，但不會檢測出射線等誘導(dǎo)的DNA斷裂(和細(xì)胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開，另一方面也不會把射線等誘導(dǎo)發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細(xì)胞判斷為凋亡細(xì)胞。

極少數(shù)細(xì)胞凋亡時沒有DNA斷裂，此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴(yán)格判斷細(xì)胞凋亡的情況下，好同時檢測多個凋亡指標(biāo)。

儲存條件：-20℃。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)	One Step TUNEL Apoptosis Assay Kit	20次\|50次	FS-X9536

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBetaReceptorI(TGFbR1)

β-1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移mei1(β4GALT1)檢測試劑盒 forBeta-1,4-Galactosyltransferase1(b4GALT1)

白介su10受體β(IL10Rβ)檢測試劑盒 forInterleukin10ReceptorBeta(IL10Rb)

基質(zhì)金屬蛋白mei11(MMP11)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase11(MMP11)

絲氨suan蛋白mei肽mei抑制因子B支成員13(SERPINB13)檢測試劑盒 forSerpinPeptidaseInhibitorCladeBMember13(SERPINB13)

B-細(xì)胞κ-輕肽基因增強(qiáng)子抑制因子激meiβ(IκBKβ)檢測試劑盒 forInhibitorOfKappa-LightPolypeptideGeneEnhancerInB-CellsKinaseBeta(IkBKb)

淀粉樣蛋白β1-42(Aβ1-42)檢測試劑盒 forAmyloidBetaPeptide1-42(Ab1-42)

基質(zhì)金屬蛋白mei7(MMP7)檢測試劑盒 forMatrixMetalloproteinase7(MMP7)

胃動su(MTL)檢測試劑盒 forMotilin(MTL)

音猬因子(SHH)檢測試劑盒 forHedgehogHomolog,Sonic(SHH)

脂聯(lián)su(ADP)檢測試劑盒 forAdiponectin(ADP)

細(xì)胞色suP450家族成員1B1(CYP1B1)檢測試劑盒 forCytochromeP4501B1(CYP1B1)

線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)檢測試劑盒 forUncouplingProtein1,Mitochondrial(UCP1)

細(xì)胞周期suL1(CCNL1)檢測試劑盒 forCyclinL1(CCNL1)

B-細(xì)胞連接蛋白(BLNK)檢測試劑盒 forB-CellLinkerProtein(BLNK)

癌胚抗原(CEA)檢測試劑盒 forCarcinoembryonicAntigen(CEA)

嗜suan性粒細(xì)胞過氧化物mei(EPX)檢測試劑盒 forEosinophilPeroxidase(EPX)
一步法TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(綠色熒光)纖維醋法酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Cellacefate

纖維醋丁酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:350mg 英文名稱：Cellaburate

醋suan纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Cellulose Acetate

微晶纖維su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：

纖維su粉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Powdered Cellulose (AS)

羧jia基纖維su鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1．5g 英文名稱：Carboxymethylcellulose Sodium

交聯(lián)聚維tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Povidone

交聯(lián)聚維tong對照品標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Crospovidone

聚異丁烯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Polyisobutylene

聚乙suan乙烯酯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱：Polyvinyl Acetate

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