當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)
貨號 | FS-X9538 |
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操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產品屬性:
產品名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 產品貨號 |
Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit | 20次|50次 | FS-X9538 |
產品介紹:
本試劑盒提供了一種高靈敏度又快速簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品,經過生物su標記和后續(xù)的DAB顯色等步驟,即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。本試劑盒足夠檢測20個樣品。 試劑盒組分: TdT酶———————————40μl Biotin-dUTP————————960μl TdT酶稀釋液(選用)—————500μl Streptavidin-HRP——————22μl Streptavidin-HRP稀釋液———1ml DAB顯色液A————————6ml DAB顯色液B————————6ml 標記反應終止液——————6ml 細胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內切酶,這些內切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現180-200bp的DNA ladder?;蚪MDNA斷裂時,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT)的催化下加上生物su(Biotin)標記的dUTP(Biotin-dUTP),隨后和辣根過氧化物酶(HRP)標記的Streptavidin(Streptavidin-HRP)結合,后在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞,這就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理。 本試劑盒有如下優(yōu)點: (1)高靈敏度:背景染色極低,陽性染色強,可以在單細胞水平檢測到細胞凋亡,同時由于凋亡早期就有DNA斷裂,可以檢測到早期的細胞凋亡。 (2)特異性好:TUNEL檢測時通常更容易標記凋亡細胞,而不容易標記壞死細胞。 (3)快速:僅需約2-3個小時即可完成。 (4)應用范圍廣:可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細胞或懸浮細胞的凋亡情況。 TUNEL法特異性檢測細胞凋亡時產生的DNA斷裂,但不會檢測出射線等誘導的DNA斷裂(和細胞凋亡時的斷裂方式不同)。這樣一方面可以把凋亡和壞死區(qū)分開,另一方面也不會把射線等誘導發(fā)生DNA斷裂的非凋亡細胞判斷為凋亡細胞。 極少數細胞凋亡時沒有DNA斷裂,此時不適用TUNEL法檢測。在個別類型的壞死細胞中也發(fā)現TUNEL檢測呈陽性。在需要嚴格判斷細胞凋亡的情況下,好同時檢測多個凋亡指標。 儲存條件:-20℃。 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
性磷suanmei(ALP)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ALP ELISA Kit,ALP,
激su敏感脂肪mei(HSL)elisa檢測試劑盒 英文名稱:HSL ELISA Kit,HSL,
肌suan激mei同工meiBB(CK-BB)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CK-BB ELISA Kit,CK-BB,
紅細胞刺激因子(ESF)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ESF ELISA Kit,ESF,
胱抑suF(CST7)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CST7 ELISA Kit,CST7,
過氧化mei(GSH-Px)elisa檢測試劑盒 英文名稱:GSH-Px ELISA Kit,GSH-Px,
髓鞘蛋白P0(MPZ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:MPZ ELISA Kit,MPZ,
腎損傷分子1(Kim-1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Kim-1 ELISA Kit,Kim-1,
瘦su受體(LEPR)elisa檢測試劑盒 英文名稱:LEPR ELISA Kit,LEPR,
傷寒抗體(St-Ab)elisa檢測試劑盒 英文名稱:St-Ab ELISA Kit,St-Ab,
妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)elisa檢測試劑盒 英文名稱:SP1/PSβ1-G ELISA Kit,SP1/PSβ1-G,
趨化因子(CCL5/RANTES)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CCL5/RANTES ELISA Kit,CCL5/RANTES,
前膠原C端肽mei(PCP)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PCP ELISA Kit,PCP,
牛兒基焦磷suan合mei(GGPS1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:GGPS1 ELISA Kit,GGPS1,
尿蛋白(UP)elisa檢測試劑盒 英文名稱:UP ELISA Kit,UP,
末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)elisa檢測試劑盒 英文名稱:TCC C5b-9 ELISA Kit,TCC C5b-9,
美洲商陸su(PWM)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PWM ELISA Kit,PWM,
TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(顯色法)百里酚標準品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Thymol
碘克沙chun相關物質D標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
他zuo巴坦suan標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Tazobactam
異抗壞血suan標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:Erythorbic Acid
拉嗪標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Mesalamine
去jia替林鹽suan鹽標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Nortriptyline Hydrochloride
5-ben基海因標準品 規(guī)格:100mg 英文名稱:5-Phenylhydantoin
辛普利鈉標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Fosinopril Sodium
相關物質B標準品 規(guī)格:20mg 英文名稱:
ben海拉明檸檬suan鹽標準品 規(guī)格:125mg 英文名稱:Diphenhydramine Citrate
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