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活細(xì)胞染色液(Hoechst 33342)(100×)
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒(WST-1法)
| 貨號 | FS-X9660 |
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培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：20T
貨號：FS-X9660
產(chǎn)品介紹:
保存條件：-20℃冰凍保存一年。 工作原理： 在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細(xì)胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細(xì)胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細(xì)胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與 DNA 斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點部位，可以通過生物標(biāo)記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后，再結(jié)合鏈酶親和素-熒光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化，在 520-530nm 發(fā)射熒光，呈黃綠色。凋亡的細(xì)包核呈黃綠色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細(xì)胞。 試劑盒內(nèi)容： 1．標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2．末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3．DIG-dUTP(×20)20μl 4．封閉液(Blocking Reagent)4ml 5．生物素化抗抗體(× 100)20μl 6．SABC-FITC(× 100)20μl 7．Proteinase K(×200)50μl 8．抗體稀釋液 4ml |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min； 2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜； 5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
蛋白激meiR(PKR)檢測試劑盒 forProteinKinaseR(PKR)
分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)檢測試劑盒 forSecretedFrizzledRelatedProtein2(SFRP2)
白介su17(IL17)檢測試劑盒 forInterleukin17(IL17)
封閉蛋白9(CLDN9)檢測試劑盒 forClaudin9(CLDN9)
輔激活因子激活因子(COAA)檢測試劑盒 forCoactivatorActivator(COAA)
Fission1蛋白(FIS1)檢測試劑盒 forFission1(FIS1)
神經(jīng)調(diào)節(jié)su3(NRG3)檢測試劑盒 forNeuregulin3(NRG3)
卷曲同源物4(FZD4)檢測試劑盒 forFrizzledHomolog4(FZD4)
70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)檢測試劑盒 forHeatShock70kDaProtein8(HSPA8)
趨化su(CHEM)檢測試劑盒 forChemerin(CHEM)
抑絲蛋白1(PFN1)檢測試劑盒 forProfilin1(PFN1)
蛙皮su6-14(BB)檢測試劑盒 forBombesin6-14(BB)
鈣蛋白mei14(CAPN14)檢測試劑盒 forCalpain14(CAPN14)
脫氨mei(GDA)檢測試劑盒 forGuanineDeaminase(GDA)
ⅩⅢ(F13)檢測試劑盒 forCoagulationFactorXIII(F13)
谷氨suan脫羧mei2(GAD2)檢測試劑盒 forGlutamateDecarboxylase2,Acid(GAD2)
血紅蛋白(HB)檢測試劑盒 forHemoglobin(HB)
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒III(FITC)馬來suan右lvben那敏標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:300mg 英文名稱：Dexchlorpheniramine Maleate
阿糖腺標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Vidarabine
匹林鈉標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱：Cephapirin Sodium
二十三suanjia酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Methyl Tricosanoate
替莫zuoan相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:15mg 英文名稱：
馬來suan單十八酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱：Monostearyl Maleate
jia氨蝶呤相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱：
托萘酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Tolnaftate
2-脫氧-2-fu-D-葡萄糖相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品
規(guī)格:15mg 英文名稱：
阿替卡因標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:40mg 英文名稱：Articaine
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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