Ki67細胞增殖檢測試劑盒(IHC法)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9606

產品介紹:

Ki-67 蛋白是細胞周期相關的一種核蛋白，主要表達于細胞增殖分裂的各個時期（G1、S、G2 和M 期），但是在靜息的細胞（G0 期）中不表達。

Ki-67 常用于檢測腫瘤細胞的生長指數(shù)（免疫組化法利用計算細胞總數(shù)中的Ki-67 陽性細胞數(shù)所占比例得到Ki-67 指數(shù)）。

中文名稱：Ki67細胞增殖檢測試劑盒(IHC法)

英文名稱：Ki-67 cell proliferation Detection Kit(IHC)

產品規(guī)格：50T

貨號：FS-X9606

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

Pim-3原癌基因(PIM3)elisa檢測試劑盒英文名稱：PIM3 ELISA Kit，PIM3，

N-酰基鞘氨chun酰an水解mei2(ASAH2)elisa檢測試劑盒英文名稱：ASAH2 ELISA Kit，ASAH2，

Neurensin1蛋白(NRSN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：NRSN1 ELISA Kit，NRSN1，

Matrin3蛋白(MATR3)elisa檢測試劑盒英文名稱：MATR3 ELISA Kit，MATR3，

分揀連接蛋白13(SNX13)elisa檢測試劑盒英文名稱：SNX13 ELISA Kit，SNX13，

泛核蛋白1(UBN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：UBN1 ELISA Kit，UBN1，

防御suβ110(DEFβ110)elisa檢測試劑盒英文名稱：DEFβ110 ELISA Kit，DEFβ110，

耳畸蛋白(OTOF)elisa檢測試劑盒英文名稱：OTOF ELISA Kit，OTOF，

多an調節(jié)因子1結合蛋白1(PMFBP1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PMFBP1 ELISA Kit，PMFBP1，

抵抗su樣蛋白β(RETNLβ)elisa檢測試劑盒英文名稱：RETNLβ ELISA Kit，RETNLβ，

蛋白激meiBγ(PKBγ)elisa檢測試劑盒英文名稱：PKBγ ELISA Kit，PKBγ，

單核細胞趨化蛋白2(MCP2)elisa檢測試劑盒英文名稱：MCP2 ELISA Kit，MCP2，

成纖維細胞生長因子受體2(FGFR2)elisa檢測試劑盒英文名稱：FGFR2 ELISA Kit，F(xiàn)GFR2，

層黏連蛋白α4(LAMα4)elisa檢測試劑盒英文名稱：LAMα4 ELISA Kit，LAMα4，

suan羧化mei(PC)elisa檢測試劑盒英文名稱：PC ELISA Kit，PC，

基質重塑關聯(lián)蛋白8(MXRA8)elisa檢測試劑盒英文名稱：MXRA8 ELISA Kit，MXRA8，

肌球蛋白ⅢA(MYO3A)elisa檢測試劑盒英文名稱：MYO3A ELISA Kit，MYO3A，
Ki67細胞增殖檢測試劑盒(IHC法)醋suanlv己定標準品規(guī)格:500mg 英文名稱：Chlorhexidine Acetate

地美溴an標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Demecarium Bromide

組an標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Histamine Dihydrochloride

L-胱氨suan標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cystine

谷氨suan標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Glutamic Acid

谷氨酰an標準品規(guī)格:100mg 英文名稱：Glutamine

甘油標準品規(guī)格:2ml 英文名稱：Glycerin

美zuo標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Cefmetazole

fu比芬鈉標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flurbiprofen Sodium

lv霉su標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Chloramphenicol

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